多發(fā)性肌炎合并肺間質(zhì)病變的血清蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、【目的】
　　尋找可預(yù)測多發(fā)性肌炎(Polymyositis，PM）及合并肺間質(zhì)病變(Interstitial lung disease，ILD)疾病發(fā)生和發(fā)展的血清蛋白質(zhì)。
　　【方法】
　　1．病例收集：收集確診為 PM患者血清3例，男性1例，女性2例，年齡為46.35±16.24y。PM+ILD患者血清3例，男性1例，女性2例，年齡為47.78±19.64y。同期健康體檢者血清3例，男性1例，女性2例，年齡為45

2、.66±17.62y。三組人員的年齡，性別皆相匹配。
　　2.三組血清在相同條件下進行三次雙向凝膠電泳分離蛋白質(zhì)點，考馬斯亮蘭染色后，各組凝膠用Image Master2D Platinum7.0 software軟件分析凝膠圖像，三組所有的凝膠均取得清晰的2－DE表達(dá)圖譜。設(shè)置平滑（Smooth=10）、顯著值（Saliency=2）、最小區(qū)域（Min Area=5）等參數(shù)進行斑點檢測，設(shè)置landmark蛋白點后進行匹配。數(shù)據(jù)

3、分析后選取光密度差異（ratio）>2且差別具統(tǒng)計學(xué)意義（anova≤0.05）的蛋白質(zhì)點為差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點。挖取差異表達(dá)蛋白質(zhì)點，酶解后進行基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）分析，并與數(shù)據(jù)庫進行匹配，鑒定蛋白質(zhì)。
　　3．第二部分實驗：擴大樣本量，入選PM組13例，年齡為47.26±15.40y；PM+ILD組6例，年齡為47.33±19.14y；SLE組年齡為46.8±17.05y；健康對照組20例

4、，年齡為44.76±13.64y，收集血清。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測三組血清中的血清淀粉樣蛋白A、凝集素、轉(zhuǎn)鐵蛋白及β2-糖蛋白1。
　　【結(jié)果】
　　1.第一部分：
　　（1）PM組找到的蛋白質(zhì)點為252±11個，PM合并ILD組找到的蛋白質(zhì)點235±8個，健康對照組找到的蛋白質(zhì)點為239±7個。
　?。?）與健康對照組比較，PM組

5、有12個差異蛋白表達(dá)上調(diào)，1個差異蛋白表達(dá)下調(diào)；表達(dá)上調(diào)的差異蛋白成功鑒定出5種差異蛋白即血清淀粉樣蛋白A、載脂蛋白A1、血清白蛋白、凝集素、β2-糖蛋白-1；表達(dá)下調(diào)的差異蛋白鑒定為轉(zhuǎn)鐵蛋白；PM合并ILD組有13個差異蛋白同時表達(dá)下調(diào)，成功鑒定出4種蛋白質(zhì)即轉(zhuǎn)鐵蛋白、鋅-a2-糖蛋白、a2-H2-糖蛋白、a1-β-糖蛋白。
　?。?）與PM組比較，PM合并ILD組的7個差異蛋白同時表達(dá)下調(diào)。成功鑒定出2種蛋白質(zhì)即β2-糖蛋白1

6、和轉(zhuǎn)鐵蛋白。
　　2．第二部分：
　?。?）血清淀粉樣蛋白A在PM、PM+ILD、SLE、HD組的血清濃度分別為609.0 ng/L、798.5 ng/L、634.0 ng/L、617.0 ng/L，在各組間比較無顯著性差異（P＞0.05）。
　?。?）凝集素在PM、PM+ILD、SLE、HD組的血清濃度分別為13.0ng/L、14.0 ng/L、11.5 ng/L、8.0 ng/L；與健康對照組比較，PM、PM+IL

7、D、SLE表達(dá)上調(diào)（差異顯著，P＜0.05），其余組間比較無顯著性差異（P＞0.05）。
　?。?）轉(zhuǎn)鐵蛋白在PM、PM+ILD、SLE、HD組的血清濃度分別為4.06 ng/L、4.67 ng/L、3.34 ng/L、3.45 ng/L，在各組間比較無顯著性差異（P＞0.05）。
　?。?）β2-糖蛋白1在PM、PM+ILD、SLE、HD組的血清濃度分別為5.0 ng/L、5.04 ng/L、3.75 ng/L、2.29