CIK細(xì)胞對肝癌細(xì)胞的殺傷作用及CCR6的表達(dá).pdf

1、研究背景：目前，一種新的腫瘤免疫治療方法-CIK細(xì)胞治療肝癌，取得顯著療效，成為繼手術(shù)、化療、放療后的第4種模式。CIK細(xì)胞是富含CD3+CD56+T細(xì)胞的一組異質(zhì)細(xì)胞，又被稱為NKT細(xì)胞，為CD8+NKT細(xì)胞。新近的研究表明CDld非限制性NKT細(xì)胞在FasL(Fas配體)的作用下能夠分泌多種趨化因子，包括CCL3、CCL4CCL5，能夠趨化各種非特異性免疫細(xì)胞(中性粒細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，單核細(xì)胞，NK細(xì)胞等)到達(dá)表達(dá)FasL的腫瘤細(xì)胞組

2、織，對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺傷，放大殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。這也說明了一些表達(dá)FasL的腫瘤細(xì)胞能夠誘導(dǎo)免疫細(xì)胞調(diào)亡而免疫逃避，但對CIK細(xì)胞仍然敏感。基于以上新進(jìn)展，我們思考CIK細(xì)胞能夠分泌細(xì)胞趨化因子，那其表達(dá)的趨化因子受體又有什么變化呢?CCR6(趨化因子受體6)，表達(dá)于各種免疫細(xì)胞的表面，其專一選擇性配體為CCL20又名LARC(肝臟和活化調(diào)節(jié)趨化因子)主要表達(dá)于肝臟細(xì)胞，招募各種免疫細(xì)胞向肝臟等組織聚集。本實驗通過研究CIK細(xì)胞CCR6

3、表達(dá)的變化，進(jìn)一步說明CIK細(xì)胞不僅能夠非特異的殺傷腫瘤細(xì)胞，而且能夠定向地向肝臟組織聚集，對肝癌的作用明顯增強(qiáng)，進(jìn)一步闡明CIK細(xì)胞對肝癌細(xì)胞殺傷作用的機(jī)制。 目的：研究CIK細(xì)胞的增殖，對肝癌細(xì)胞的殺傷活性，及CCR6表達(dá)的變化。 方法：選取5例健康人外周血淋巴細(xì)胞，通過序列添加INF-γ，anti-CD3McAb，IL-2進(jìn)行CIK培養(yǎng)；使用MTT法測定對肝癌細(xì)胞HtepG2的殺傷作用；使用流式細(xì)胞法檢測CCR6的

4、表達(dá)情況。 結(jié)果：(1)CIK細(xì)胞具有培養(yǎng)方法簡易，擴(kuò)增迅速，前后擴(kuò)增約達(dá)138倍。(2)CIK細(xì)胞對肝癌細(xì)胞HepG2殺傷作用明顯，在效靶比為20：1，10：1，5：1時，殺傷率分別為0.56±0.08、0.21±0.05、0.08±0.03。(3)培養(yǎng)后的CIK細(xì)胞CCR6陽性表達(dá)率從開始的19.2％增加到第21天的38.9％；CD8+CCR6+雙表達(dá)率也從7.6％增加到26.9％，CCR6表達(dá)增加，并且主要是CD8+T的C