BMl-111在低劑量氯化鎘誘導(dǎo)的大鼠子癇前期模型中的作用研究.pdf

1、子癇前期(Preeclampsia，PE)是發(fā)生于妊娠20周后的以高血壓、蛋白尿、水腫等為主要特征，并可伴有心、肝、腎、腦等多器官功能損傷的妊娠綜合癥，發(fā)生率為2.5％～3％，是造成孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒死亡的重要原因之一。PE的病因復(fù)雜，至今尚無一種學(xué)說可以完全解釋其病因及病理生理過程。近年來，“過度炎癥反應(yīng)”成為PE的主要病因?qū)W說。引起過度炎癥反應(yīng)的因素有很多，隨著全球工業(yè)化的快速發(fā)展，環(huán)境污染的加劇以及吸煙人數(shù)的大量增加，環(huán)境因素引起人類

2、越來越多的重視。鎘，作為工業(yè)化生產(chǎn)的一種有毒的化學(xué)物質(zhì)，與人類許多疾病的發(fā)生密切相關(guān)，如腫瘤、骨疾病、高血壓等，對(duì)人類身體健康的影響越來越大。有研究報(bào)道利用低劑量的氯化鎘(Cadmium chloride，CdCl2)能夠成功誘導(dǎo)出孕鼠PE癥狀。而如何有效地治療PE是一個(gè)非常重要的問題。脂氧素是花生四烯酸的代謝產(chǎn)物，具有抑制炎癥的作用，在PE患者血清及胎盤中脂氧素的濃度明顯低于正常孕婦。在LPS誘導(dǎo)的經(jīng)典PE動(dòng)物模型中，脂氧素的介入治療

3、可以緩解PE癥狀。但是，在低劑量CdCl2誘導(dǎo)的大鼠PE模型中，脂氧素類似物(BML-111)是否具有同樣的治療作用并不清楚。
　　目的：
　　摸索CdCl2誘導(dǎo)大鼠PE模型的最佳時(shí)間點(diǎn)及最佳劑量;探索在低劑量CdCl2誘導(dǎo)的大鼠PE模型中，脂氧素類似物(BML-111)是否具有改善PE引起的病理生理變化，并緩解PE癥狀的作用;同時(shí)，進(jìn)一步探討該治療作用具體是通過什么機(jī)制實(shí)現(xiàn)的。
　　方法：
　　(1)摸索CdC

4、l2誘導(dǎo)大鼠PE模型的最佳時(shí)間點(diǎn)與最佳劑量。將25只基礎(chǔ)血壓正常的Wistar孕鼠隨機(jī)分為5組(n=5)，對(duì)照組、D7組、D9組、D11組、D13組。對(duì)照組腹腔注射無菌生理鹽水1mL/D，6天;后4組分別于妊娠第7天、第9天、第11天、第13天腹腔注射0.125mg/kg/D Cdcl2，共6天。定期監(jiān)測(cè)孕鼠血壓，得到最佳時(shí)間點(diǎn)。另將15只基礎(chǔ)血壓正常的Wistar孕鼠隨機(jī)分為3組(n=5):分別為對(duì)照組、0.25mg/kg/D CdC

5、l2處理組、0.125mg/kg/D CdCl2處理組。于妊娠第9天起，對(duì)照組腹腔注射1mL/D無菌生理鹽水，6天;后兩組分別腹腔注射0.25mg/kg/D、0.125mg/kg/D，6天;定期監(jiān)測(cè)孕鼠血壓，得到最佳劑量。(2)探索脂氧素類似物（BML-111）在低劑量CdCl2誘導(dǎo)的大鼠PE模型中的治療作用將15只基礎(chǔ)血壓正常的Wistar孕鼠隨機(jī)分為3組(n=5):對(duì)照組(Con)、模型組(Cd)、治療組(Cd+BML-111)。對(duì)

6、照組于妊娠第9天腹腔注射無菌生理鹽水1mL/D，共6天;模型組于妊娠第9天腹腔注射CdCl20.125mg/kg/D，共6天;治療組于妊娠第9天腹腔注射CdCl20.125mg/kg/D，同時(shí)腹腔注射脂氧素類似物(BML-111)1mg/kg/D，共6天。定期監(jiān)測(cè)各組孕鼠體重及血壓。蛋白免疫印跡分析-Western Blot法測(cè)定各組孕鼠胎盤組織ERK1/2、STAT-3蛋白的磷酸化水平;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)各組胎盤組織IL-6、

7、IL-10、TNF-αmRNA表達(dá)量;H-E染色法觀察各組孕鼠胎盤及腎臟組織病理形態(tài)學(xué)方面的變化。
　　結(jié)果：
　　(1)腹腔注射0.125mg/kg/D CdCl2，6天，各組孕鼠與自身基礎(chǔ)血壓值相比，其中D9組收縮壓明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余各組血壓升高均不明顯，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;妊娠第9～14天腹腔注射0.125mg/kg/D CdCl2組和0.25mg/kg/D CdCl2組收縮壓與自身基礎(chǔ)血壓相比，收縮壓呈明

8、顯升上升趨勢(shì)，且明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。故選取妊娠D9～14天腹腔注射CdCl20.125mg/kg/D建立大鼠PE模型。
　　(2)模型組孕鼠血壓較對(duì)照組明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)經(jīng)脂氧素類似物(BML-111)治療后孕鼠血壓明顯下降，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　(3)妊娠第3天三組孕鼠24小時(shí)尿蛋白含量無明顯差異，妊娠第19天，模型組孕鼠24小時(shí)尿蛋白含量較對(duì)照組明顯升高，差

9、異具有顯著性(P＜0.05)。治療組孕鼠24小時(shí)尿蛋白含量較模型組明顯降低，差異同樣具有顯著性(P＜0.05)，與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(4)模型組胎盤組織ERK1/2、STAT3蛋白磷酸化水平明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);治療組胎盤組織ERK1/2、STAT3磷酸化水平較模型組明顯下降，差異同樣也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(5)模型組胎盤炎癥因子IL-6、TNF

10、-α較對(duì)照組明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，經(jīng)脂氧素類似物(BML-111)治療后表達(dá)量下降，與對(duì)照組相比無明顯差異。模型組調(diào)節(jié)性因子IL-10表達(dá)量明顯高于對(duì)照組，經(jīng)脂氧素類似物(BML-111)治療后表達(dá)量又顯著增高，三組之間兩兩比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　(6)通過HE染色方法，觀察發(fā)現(xiàn)模型組胎盤組織可見炎性細(xì)胞大量浸潤(rùn)，胎盤絨毛間質(zhì)損傷，微血栓形成，細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞及合體滋養(yǎng)細(xì)胞排列紊亂。治療

11、組胎盤炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較模型組減少，未見微血栓形成，細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞及合體滋養(yǎng)細(xì)胞排列較模型組整齊有序。模型組腎臟形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞增生，球囊間隙狹窄，可見炎性細(xì)胞大量浸潤(rùn)。治療組腎小球形態(tài)結(jié)構(gòu)無明顯異常，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞無明顯增生，未見明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　結(jié)論：
　　妊娠第9～14天腹腔注射0.125mg/kg/D氯化鎘能成功復(fù)制出大鼠PE模型;脂氧素類似物(BML-111)能夠抑制胎盤組織中ERK1/2、STA