BML-111通過抑制MAPK信號通路減輕大鼠失血性休克所致肺損傷.pdf

1、目的:探討脂氧素受體激動劑(lipoxin receptor agonist)BML-111對失血性休克(hemorrhagic shock,HS)所致大鼠急性肺損傷(acute lung injury,ALI)的影響及其作用機制。
　　方法:選擇32只健康雄性SD大鼠,根據(jù)是否放血以及給藥的不同隨機分為4組,分別為對照(sham)組,失血性休克/復蘇(HS)組,BML-111干預(BML-111)組,BMl-111加BOC-2干

2、預(BOC-2)組。將大鼠麻醉后依次進行左側(cè)頸總動脈插管與右側(cè)頸靜脈插管。左側(cè)動脈插管連接壓力轉(zhuǎn)換器,用以放血和檢測平均動脈壓(mean arterial pressure,MAP)的變化。右側(cè)頸靜脈插管用于補液復蘇。除sham組大鼠外,其余三組大鼠均進行放血處理,使其失去35％血容量造成失血性休克模型,休克持續(xù)30分鐘后進行復蘇。BML-111組復蘇開始時腹腔注射1mg/kg劑量的BML-111,BOC-2組在麻醉后腹腔注射50μg/

3、kg劑量的BOC-2,并于復蘇開始時腹腔注射1mg/kg劑量的BML-111。所有組大鼠在復蘇結(jié)束后2小時放血處死,收集支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)并取肺組織標本于-80℃冰箱保存。HE切片染色觀察各組大鼠標本的肺組織損傷情況;檢測肺濕干重比(W/D);檢測BALF細胞分類計數(shù);免疫組織化學染色法檢測髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)表達水平;染色酶聯(lián)免疫法(

4、enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測肺組織IL-1β和IL-6表達水平;免疫蛋白印跡法(western-blot assay,WB)檢測大鼠肺組織絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)磷酸化激活水平;電泳遷移率分析法(electrophoretic mobility shift assays,EMSA)檢測激活蛋白1(activat

5、or protein-1,AP-1)與DNA的結(jié)合活性。
　　結(jié)果:(1)顯微鏡觀察結(jié)果顯示sham組大鼠肺組織切片無明顯炎癥損傷改變;HS組肺組織切片有明顯的肺組織炎性細胞浸潤,肺泡壁增厚,透明膜形成等炎癥損傷表現(xiàn);BML-111組炎癥損傷明顯減輕;BOC-2組則表現(xiàn)出與HS組相似的病理組織學改變。(2)相對于sham組,HS組BALF中性粒細胞計數(shù)明顯增高(P<0.05);相對于HS組,BML-111組BALF中性粒細胞計數(shù)明

6、顯減少(P<0.05);相對于BML-111組,BOC-2組BALF中性粒細胞計數(shù)明顯增高(P<0.05),與HS組數(shù)量相近。(3)與sham組相比,HS組肺組織W/D明顯升高(P<0.05);與HS組相比,BML-111組肺組織W/D明顯下降(P<0.05);在對大鼠BOC-2干預后,肺組織W/D又明顯升高(P<0.05)。(4)與sham組相比,HS組MPO陽性表達明顯增多(P<0.05);與HS組相比,BML-111組MPO陽性表

7、達顯著下降(P<0.05);與BML-111組相比,BOC-2組MPO陽性表達量又明顯升高(P<0.05)。(5)相對于sham組,HS組肺組織IL-1β和IL-6含量顯著增多(P<0.05);相對于HS組,BML-111使大鼠肺組織IL-1β和IL-6含量明顯下降(P<0.05;使用BOC-2后,大鼠肺組織IL-1β和IL-6含量相比于BML-111組又明顯增多(P<0.05。(6)與sham組相比,HS組大鼠肺組織ERK,JNK,p

8、38MAPK磷酸化水平明顯提高(P<0.05);使用BML-111使大鼠肺組織ERK,JNK,p38MAPK磷酸化水平相較于HS組明顯降低(P<0.05);而在對大鼠注射BOC-2后,ERK,JNK,p38MAPK磷酸化水平相比于BML-111組又明顯升高(P<0.05)。(7)與sham組相比,HS組AP-1DNA結(jié)合活性顯著升高;與HS組相比,BML-111組AP-1DNA結(jié)合活性明顯下降;BOC-2組AP-1DNA結(jié)合活性相對于B