茶多酚與ERK信號(hào)通路阻斷劑改善心肺復(fù)蘇后腦損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景和目的：
　　各種原因?qū)е碌男呐K驟停(cardiac arrest，CA)，均可造成全身臟器組織嚴(yán)重缺血缺氧，及時(shí)有效的實(shí)施心肺復(fù)蘇(cardiopulmonaryresuscitation，CPR)恢復(fù)患者的自主循環(huán)(restoration of spontaneouscirculation，ROSC)是挽救患者生命的必要救治手段。然而，CPR后出現(xiàn)的腦缺血再灌注損傷，是影響患者復(fù)蘇后恢復(fù)的一大威脅，相關(guān)病理機(jī)制包括活性氧(

2、Reactive oxygen species，ROS)損傷、興奮性氨基酸中毒、鈣超載和細(xì)胞凋亡等。在眾多病理因素中，過量的ROS產(chǎn)生是引起腦缺血再灌注損傷的主要因素，故在CPR后如何減少ROS生成以減輕大腦的損傷已是臨床急救醫(yī)學(xué)領(lǐng)域目前研究的熱點(diǎn)。
　　降低ROS含量可減少復(fù)蘇后腦損傷，一方面可對(duì)抗ROS導(dǎo)致的氧化應(yīng)激損傷，另一方面也可抑制ROS作為生物信號(hào)，通過激活絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated pro

3、tein kinascs，MAPK)信號(hào)通路，引起更多ROS生成而導(dǎo)致的腦損傷。本課題組前期已研究證實(shí)，抗氧化劑茶多酚(teapolyphenols，TP)除了具有抗氧化作用外，也可通過影響MAPK信號(hào)通路發(fā)揮對(duì)腦組織的保護(hù)作用。復(fù)蘇后ROS生成增多及C-jun氨基末端激酶(C-jun N-terminal kinase，JNK)信號(hào)通路的激活，對(duì)腦組織有明顯的損傷作用，使用TP與JNK信號(hào)通路阻斷劑后，能夠降低ROS、丙二醛(Malo

4、ndialdehyde，MDA)含量，提高超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活性，減輕大鼠海馬神經(jīng)元的損傷，從而提高生存時(shí)間和遠(yuǎn)期生存率。本課題組在前期研究的基礎(chǔ)上，從MAPK家族中的另一通路，即細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)信號(hào)通路著手，探討ERK信號(hào)通路斷劑是否也能降低ROS、MDA含量，提高SOD活性，ERK信號(hào)通路阻斷劑與TP

5、合用是否能提升TP對(duì)腦組織的保護(hù)功能。
　　方法：
　　ROSC后的Sprague Dawley(SD)大鼠168只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(shamoperation，SH)、缺血再灌注組(ischemia reperfusion，IR)、TP組、ERK信號(hào)通路斷劑組(PD98059，PD)、TP+PD組。除SH組外，其余各組均經(jīng)食道交流電刺激心室建立CA模型，心臟驟停5分鐘后行心肺復(fù)蘇。造模成功后的大鼠隨機(jī)經(jīng)股靜脈給予TP(1

6、0mg/kg)、PD(0.3mg/kg)、TP+PD，IR組則給予同等劑量生理鹽水。自主循環(huán)恢復(fù)后在12h、24h、48h、72h這四個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，并檢測腦組織ROS和MDA含量及SOD活性，以72h為終點(diǎn)觀察生存時(shí)間及生存率。
　　結(jié)果：
　　1.生存時(shí)間 SH組均能存活至生存時(shí)間的觀察終點(diǎn)72h;與IR組比較，TP、PD、TP+PD組生存時(shí)間明顯延長(26.38±25.40vs52.08±14.34，52.2

7、5±19.09，60.08±19.60，P＜0.01)，其中TP+PD組生存時(shí)間最長，明顯長于IR組，但TP、PD、TP+PD三組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)。
　　2.累積生存率 SH組大鼠存活至72h的累積生存率均為100％。與IR組比較，TP組和PD組在12和24h的累積生存率明顯升高(P＜0.05)，但48h和72h無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05);與IR組比較，TP+PD組在12h，24h，48h和72h的累積生存率明

8、顯升高（P＜0.05）;在72h時(shí)，TP+PD組累積生存率明顯高于TP組（P＜0.05)，但PD和TP+PD組之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)。
　　3.神經(jīng)功能評(píng)分 SH組大鼠在12h、24h、48h、72h神經(jīng)功能評(píng)分均為滿分80分。與IR組比較，TP、PD、TP+PD組在12h時(shí)(48.77±6.74vs59.09±7.20,62.23±3.00,63.08±3.57,P＜0.05)、24h(54.86±2.81vs65

9、.60±2.69,67.35±4.17,68.46±3.54,P＜0.05)、48h(59.25±4.54vs70.99±2.07，71.65±2.35，72.65±2.36，P＜0.05)神經(jīng)功能評(píng)分均升高，其中TP+PD組神經(jīng)功能評(píng)分最高，但TP、PD和TP+PD組三組間神經(jīng)功能評(píng)分無明顯差異(P＞0.05)。
　　4.ROS含量與SH組相比，IR組在12h、24h、48、72h ROS含量均明顯升高(421.49±32.40

10、vs767.80±13.41，413.57±37.46vs822.56±44.83,415.33±18.54 vs721.17±34.27,390.95±35.73 vs615.67±24.58，P＜0.01）;與IR組比較，TP組、PD組、TP+PD組分別在各時(shí)間點(diǎn)ROS含量降低(767.80±13.41vs582.17±13.41，371.70±10.30，367.87±16.20;822.56±44.83vs648.74±56.2

11、3,387.80±33.50,384.78±68.42;721.17±34.27vs534.07±57.44,383.31±22.18,364.19±35.48;615.67±24.58vs458.72±54.90,375.85±39.00,360.91±21.88，P＜0.05或P＜0.01）。TP組在各時(shí)間點(diǎn)ROS含量均高于PD組、TP+PD組（P＜0.05);PD組和TP+PD組兩組間比較無差異（P＞0.05);除SH組外，IR組

12、、TP組、PD組和TP+PD組在各時(shí)間點(diǎn)的ROS均在24h達(dá)到高峰。
　　5.MDA含量與SH組相比，IR組在12h、24h、48、72h的MDA含量均明顯升高(4.67±0.66vs7.47±6.01,4.50±0.60 vs8.38±0.75,4.90±1.03 vs10.19±0.70,4.80±0.66 vs7.50±7.29，P＜0.05);與IR組相比，TP、 PD、 TP+PD組在各時(shí)間點(diǎn)MDA含量降低(7.47±6

13、.01vs5.15±0.75,5.82±0.80,6.13±1.10;8.38±0.75vs5.56±1.10,9.16±0.63,8.68±1.01;10.19±0.70vs6.41±0.81,5.19±0.62,5.28±0.46;7.50±7.29vs5.34±6.22,5.03±0.71,5.22±0.61，P＜0.05)。在24h時(shí)PD、 TP+PD組MDA含量高于TP，但在48h時(shí)PD、 TP+PD組MDA含量低于TP。

14、r>　　6.SOD活性與SH組相比，IR組各時(shí)間點(diǎn)SOD活性均明顯下降(120.67±8.96vs75.16±4.85,122.55±9.49 vs61.65±8.56,117.08±12.10 vs54.13±5.81,118.40±10.50 vs60.67±7.17，P＜0.05);與IR組相比，TP、 PD、 TP+PD組而SOD活力升高(75.16±4.85vs101.28±8.55,97.33±7.02,92.78±8.74

15、;61.65±8.56vs91.41±11.13,70.60±8.47,79.39±8.24;54.13±5.81vs82.71±7.56,84.16±6.75,87.16±6.75;60.67±7.17vs93.30±7.61,83.24±7.03,91.36±12.83，P＜0.05)。在24h時(shí)PD、 TP+PD組SOD活力低于TP組，但在48h時(shí)PD、 TP+PD組SOD活力高于TP組。
　　7.在復(fù)蘇后24h時(shí)觀察腦組織