大鼠心肺復(fù)蘇后腦損傷及氯化血紅素的干預(yù)研究.pdf

1、目的：
　　 通過觀察大鼠心肺復(fù)蘇(CardiopulmonaryResuscitation，CPR)后神經(jīng)功能缺損評分(NeuroDeficitScore，NDS)，腦水含量，大腦皮質(zhì)區(qū)及海馬區(qū)腦紅蛋白(Neuroglobin，NGB)表達(dá)，ATP，Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性以及病理的變化，同時給予不同濃度氯化血紅素(Hemin)后的影響，研究大鼠CPR后腦損傷及其可能的機(jī)制，以及Hemi

2、n對CPR后腦損傷的作用機(jī)制及其濃度相關(guān)性。
　　 方法：
　　 成年雄性Sprague-Dauley(SD)大鼠160只，隨機(jī)分成對照組(A組)、常規(guī)復(fù)蘇組（B組）、常規(guī)復(fù)蘇加小劑量Hemin干預(yù)組（C組）、常規(guī)復(fù)蘇加大劑量Hemin干預(yù)組（D組），各組分別按氣管切開后(A組)或自主循環(huán)恢復(fù)(RecoveryofSpontaneousCirculation，ROSC)后（B、C、D組）0.5h、3h、6h、12h、24

3、h分為5個亞組(N=8)。B、C、D組采用窒息致心博驟停(CA)方法建立大鼠心肺復(fù)蘇模型，并予以血液動力學(xué)監(jiān)測。B組于ROSC后2min內(nèi)腹腔注射生理鹽水(劑量10ml/Kg)，C、D組于ROSC后2min內(nèi)腹腔注射Hemin(C組Hemin濃度9mmol/L，劑量10ml/Kg；D組Hemin濃度18mmol/L，劑量10ml/Kg)。A組僅施行麻醉、氣管切開、血管穿刺等操作，不窒息及復(fù)蘇，于氣管插管后腹腔注射生理鹽水(劑量10ml/

4、Kg)。對各亞組大鼠于相應(yīng)時間點(diǎn)進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分(NDS)。以干-濕比質(zhì)量法測量ROSC后各時間點(diǎn)大鼠腦組織含水量。以免疫組織化學(xué)染色法測定大鼠ROSC后各時間點(diǎn)(0.5h、3h、6h、12h、24h)大腦皮質(zhì)區(qū)及海馬區(qū)NGB表達(dá)。以高效液相色譜法檢測大鼠大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)ATP。以吸光度法檢測大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性。光鏡下觀察大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)的組織病理變化。實驗數(shù)據(jù)作單

5、因素方差分析，組間比較用LSD法或Tamhane's檢驗。
　　 結(jié)果：
　　 1．造模前所有大鼠NDS均為80分，B、C、D組大鼠NDS于ROSC后3h最低，以后逐漸升高，至24h已恢復(fù)至70分以上：與A組同時間點(diǎn)比較，B組NDS均明顯降低（P＜0.01），C、D組NDS于3h、6h、12h明顯降低（P＜0.01）；與B組同時間點(diǎn)比較，C、D組NDS于6h、12h、24h明顯提高(P＜0.05或P＜0.01)。C組與D

6、組同時間點(diǎn)比較，NDS變化無明顯差異（P＞0.05）。
　　 2.與A組同時間點(diǎn)比較，B、C、D組腦水含量顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)；與B組比較，C、D組腦水含量于12h、24h明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)；與C組相比，D組腦水含量于24h明顯降低(P＜0.05)。
　　 3.A組大鼠大腦皮質(zhì)區(qū)及海馬區(qū)NGB陽性神經(jīng)細(xì)胞數(shù)表達(dá)穩(wěn)定，不同時間點(diǎn)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與A組同時間點(diǎn)比較，

7、B組大腦皮質(zhì)區(qū)NGB表達(dá)于12h、24h明顯升高（P＜0.05或P＜0.01)，C、D組大腦皮質(zhì)區(qū)NGB表達(dá)于6h、12h、24h明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)，B、C、D組海馬區(qū)NGB表達(dá)于12h、24h明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）；與B組同時間點(diǎn)比較，C、D組大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)NGB表達(dá)于12h、24h明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；與C組同時間點(diǎn)比較，D組大腦皮質(zhì)區(qū)NGB表達(dá)于12h、24h明顯升高(P＜

8、0.05或P＜0.01)，在海馬區(qū)NGB表達(dá)于24h明顯升高（P＜0.05）。
　　 4．A組大鼠大腦皮層和海馬區(qū)ATP含量穩(wěn)定，各時間點(diǎn)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與A組同時間點(diǎn)比較，B、C、D組大鼠大腦皮層和海馬區(qū)ATP、明顯降低（P＜0.01或P＜0.05）；與B組同時間點(diǎn)比較，C、D組大鼠大腦皮層和海馬區(qū)ATP于12h、24h明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）;與C組同時間點(diǎn)比較，D組大腦皮層和海馬區(qū)ATP

9、于24h明顯升高（P＜0.05）。
　　 5.A組大鼠大腦組織中Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性強(qiáng)，大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性各時間點(diǎn)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與A組同時間點(diǎn)比較，B、C、D組大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)各時間點(diǎn)Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）；與B組同時

10、間點(diǎn)比較，C組大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性于12h、24h明顯升高（P＜0.01），D組于6h、12h、24h明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；與C組同時間點(diǎn)比較，D組大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性于24h明顯升高（P＜0.05）。
　　 6．光鏡下，A組大鼠大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)細(xì)胞數(shù)量多，形態(tài)完整，胞核大而圓，異染色質(zhì)

11、少，?？梢娒黠@的核仁。B組大腦皮質(zhì)區(qū)和海馬區(qū)細(xì)胞損傷嚴(yán)重，尤以海馬區(qū)為著。C組和D組損傷改變明顯減輕，兩組形態(tài)變化比較無明顯差別。
　　 結(jié)論：
　　 (1)窒息致CA大鼠復(fù)蘇后早期，腦NGB表達(dá)程度不一，大腦皮質(zhì)NGB表達(dá)增高，海馬區(qū)NGB表達(dá)降低：腦能量代謝障礙明顯，ATP、Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性明顯降低；同時，腦水含量明顯升高、NDS分值明顯降低、腦病理改變明顯。