S100A8-A9在心臟驟停心肺復蘇后腦損傷中的作用及機制研究.pdf

1、第一部分、心臟驟停心肺復蘇模型的建立
　　目的：復制8 min心臟驟停心肺復蘇后腦缺血/再灌注損傷模型。
　　方法：采用經(jīng)頸內(nèi)靜脈注射冰氯化鉀誘導心臟驟停8min后注射腎上腺素和心臟按壓進行復蘇的方法復制心臟驟停心肺復蘇模型。40只C57BL/6小鼠隨機分為兩組（n=20）:心臟驟停心肺復蘇組（CA/CPR組）和假手術(shù)組（SHAM組）。模型建立后記錄自主循環(huán)恢復率；24h存活率；24h后進行神經(jīng)功能評分；HE染色后在光學顯微

2、鏡下觀察海馬神經(jīng)元形態(tài)學改變。
　　結(jié)果：CA/CPR組自主循環(huán)恢復率為75％,存活率為65%，假手術(shù)組分別是90%和90%，自主循環(huán)恢復率沒有統(tǒng)計學差異（P>0.05）；CA/CPR組神經(jīng)功能評分顯著低于假手術(shù)組（P<0.05）；在光學顯微鏡下觀察到CA/CPR組海馬神經(jīng)元粉紅色嗜酸性胞漿及深染、固縮的細胞核，CA/CPR組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元死亡數(shù)目明顯增多與SHAM組比較（P<0.05）。
　　結(jié)論：靜脈注射冰氯化鉀誘導

3、心臟驟停心肺復蘇模型具有良好的成功率和可靠性。
　　第二部分、S100A8/A9對小鼠心臟驟停心肺復蘇后腦損傷的影響
　　目的：在體內(nèi)研究S100A8/A9對小鼠心臟驟停心肺復蘇后腦損傷的影響，以便為進一步探討其作用機制打下基礎(chǔ)。
　　方法：采用經(jīng)頸內(nèi)靜脈注射冰氯化鉀誘導心臟驟停8min后注射腎上腺素和心臟按壓進行復蘇的方法復制心臟驟停心肺復蘇模型。80只雄性C57BL/6小鼠隨機分為2組(n=40)：心臟驟停心肺復蘇

4、(CA/CPR)組和對照組(SHAM)組。各組存活的小鼠24h后斷頭取腦。免疫組織化學法檢測海馬組織中小膠質(zhì)細胞特異性標志抗體Iba-1的表達；Western blot法檢測海馬組織中S100A8/A9、TLR4、RAGE、NF-κB的表達；ELISA法測定海馬組織中炎性細胞因子TNF-α、IL-1β的表達水平。
　　結(jié)果：與對照組相比CA/CPR組海馬CA1區(qū)Iba-1表達增加(P<0.05)；在光學顯微鏡下觀察海馬組織小膠質(zhì)細

5、胞病理學形態(tài)改變從靜止的樹枝狀形態(tài)向激活的阿米巴樣形態(tài)轉(zhuǎn)變；海馬組織中S100A8/A9、TLR4、RAGE、NF-κB的表達明顯增加與對照組相比(P<0.05)；海馬組織中炎癥細胞因子TNF-α和IL-1β表達顯著增加與對照組相比(P<0.05)。
　　結(jié)論：CA/CPR激活小膠質(zhì)細胞、釋放炎癥因子導致神經(jīng)元死亡，S100A8/A9參與小鼠心臟驟停心肺復蘇后腦組織損傷的早期炎癥反應過程。
　　第三部分、S100A8/A9對

6、TLR4/NF-κB和RAGE/NF-κB信號通路的影響
　　目的：在BV-2細胞中研究S100A8/A9蛋白對TLR4/NF-κB和RAGE/NF-κB信號通路的影響，探討其誘導炎癥反應的機制。
　　方法：在BV-2細胞中分別用TLR4siRNA和RAGEsiRNA敲除TLR4和RAGE的表達，再用S100A8/A9蛋白處理BV-2細胞6h，Western blot檢測TLR4、RAGE和NF-κB p65表達水平；ELI

7、SA檢測炎癥因子TNF-α和IL-1β的表達。
　　結(jié)果：S100A8/A9處理BV-2細胞6h后，TLR4、RAGE、NF-κB蛋白表達顯著增加與對照組相比(P<0.05)；siRNA敲除TLR4和RAGE降低S100A8/A9誘導的炎癥因子TNF-α及I L-1β增加與對照組相比(P<0.05)；siRNA敲除TLR4和RAGE介導的抑制炎癥因子表達伴隨著抑制NF-κB活化與對照組相比(P<0.05)。
　　結(jié)論：S10