干預(yù)血漿硫化氫水平對(duì)膿毒癥ARDS肺血管通透性影響的研究.pdf

1、目的：
　　1.探討膿毒癥大鼠血漿硫化氫水平與膿毒癥ARDS血管通透性的關(guān)系，以及增加外源性硫化氫對(duì)ARDS肺血管通透性的影響。
　　2.對(duì)膿毒癥ARDS大鼠應(yīng)用具有影響氣體信號(hào)分子NO和CO的烏司他丁，觀察其是否影響氣體信號(hào)分子H2S的變化，以確定烏司他丁是否具有調(diào)節(jié)血漿H2S水平的作用。進(jìn)一步探討烏司他丁的抗炎癥反應(yīng)機(jī)制。通過(guò)完成以上兩個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)初步確定是否可以通過(guò)干預(yù)血漿硫化氫水平來(lái)影響膿毒癥ARDS肺血管通透性，改變

2、ARDS病理生理過(guò)程，進(jìn)一步明確臨床抗炎藥物烏司他丁的作用機(jī)理，為今后研究ARDS藥物提供新思路。
　　方法：健康雄性SD大鼠80只，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表，用完全隨機(jī)分組法隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組、膿毒癥ARDS組、硫氫化鈉干預(yù)組和烏司他丁干預(yù)組，每組20只，（1）假手術(shù)對(duì)照組：剖腹探查，但不進(jìn)行盲腸結(jié)扎及穿孔，16小時(shí)后行血?dú)夥治霾⒏骨蛔⑸渖睇}水1ml。（2）膿毒癥ARDS組:行盲腸結(jié)扎加穿孔造膿毒癥 ARDS模型，16小時(shí)后行血?dú)夥治?/p>

3、并腹腔注射生理鹽水1ml。（3）硫氫化鈉干預(yù)組：盲腸結(jié)扎加穿孔，16小時(shí)后行血?dú)夥治霾⒏骨蛔⑸淞驓浠c（按28umol/Kg配成1ml液體）。（4）烏司他丁干預(yù)組：行盲腸結(jié)扎穿孔，16小時(shí)后行血?dú)夥治霾?0萬(wàn)單位/Kg計(jì)算烏司他丁應(yīng)用量，配成1ml溶液，經(jīng)由股靜脈注入。以大鼠出現(xiàn)呼吸窘迫，口唇發(fā)紺，肺部聞及哮鳴音，頑固性低氧狀況不能自發(fā)緩解，達(dá)到 PaO2/FiO2≤300為ARDS模型成功標(biāo)準(zhǔn)。各組進(jìn)行相關(guān)處理后，48小時(shí)后行動(dòng)脈血

4、氣檢查、血漿硫化氫測(cè)定、肺泡灌洗液蛋白濃度測(cè)定、肺組織伊文氏藍(lán)含量測(cè)定和稱(chēng)量肺臟濕重與干重，同時(shí)取肺組織標(biāo)本進(jìn)行光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡觀察。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，比較不同組別各指標(biāo)差異，多組間比較用單因素方差分析，兩兩比較用q檢驗(yàn)，采用Pearson法將血漿硫化氫濃度與血管通透性指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析，以P<0.05表示差異具有顯著性。
　　結(jié)果：
　　1.48小時(shí)動(dòng)脈血?dú)夥治觯耗摱景YARDS組大鼠動(dòng)脈血氧分壓平均值明顯

5、低于假手術(shù)對(duì)照組（P<0.05）。硫氫化鈉與烏司他丁兩組動(dòng)脈血氧分壓無(wú)顯著性差別（P>0.05)，均低于假手術(shù)對(duì)照組，但仍高于膿毒癥ARDS組（P<0.05）。
　　2.血漿硫化氫濃度：膿毒癥ARDS組與假手術(shù)對(duì)照組比較血漿中 H2S濃度顯著降低。與膿毒癥ARDS組相比，硫氫化鈉干預(yù)組及烏司他丁干預(yù)組血漿硫化氫水平均明顯升高（P<0.05），但仍低于假手術(shù)對(duì)照組。
　　3.肺泡灌洗液蛋白濃度：膿毒癥ARDS組肺泡灌洗液中蛋白

6、濃度明顯高于假手術(shù)對(duì)照組（P<0.05），與膿毒癥ARDS組比較，硫氫化鈉干預(yù)組與烏司他丁干預(yù)組肺泡灌洗液中白蛋白濃度降低。
　　4.伊文氏藍(lán)含量：膿毒癥ARDS組肺組織伊文氏藍(lán)含量明顯增加。硫氫化鈉干預(yù)組與烏司他丁干預(yù)組與膿毒癥ARDS組比較伊文氏藍(lán)含量均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　5.肺臟濕干重比：膿毒癥ARDS組大鼠較假手術(shù)對(duì)照組肺濕干重比明顯增加。硫氫化鈉、烏司他丁干預(yù)組濕干重比比膿毒癥ARD

7、S組明顯降低（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但仍高于假手術(shù)對(duì)照組。
　　6.HE染色光學(xué)顯微鏡觀察：假手術(shù)對(duì)照組肺泡結(jié)構(gòu)清晰，肺泡和肺間質(zhì)未見(jiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)充血滲出。膿毒癥ARDS組大鼠肺泡腔變窄，肺泡壁明顯增厚，肺間質(zhì)水腫，肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)粒細(xì)胞、水腫液明顯滲出。硫氫化鈉和烏司他丁干預(yù)ARDS組與膿毒癥ARDS組比較肺組織損傷程度減輕。
　　7.電子顯微鏡觀察：假手術(shù)對(duì)照組血管內(nèi)皮細(xì)胞胞核胞質(zhì)清楚，線粒體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)

8、構(gòu)正常，緊密連接未打開(kāi)。膿毒癥ARDS組肺組織超微結(jié)構(gòu)明顯受損，內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)與胞核變性壞死，只能看到血管輪廓。硫氫化鈉干預(yù)組肺組織超微結(jié)構(gòu)與膿毒癥ARDS組比較損傷程度減輕，內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常，線粒體輕度腫脹。烏司他丁干預(yù)組肺組織超微結(jié)構(gòu)較膿毒癥ARDS組損傷程度減輕，內(nèi)皮結(jié)構(gòu)基本正常，少部分胞膜與嵴模糊不清。
　　8.相關(guān)性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：（1）膿毒癥 ARDS大鼠血漿硫化氫水平與肺濕干重比例呈負(fù)相關(guān)（r=-0.835,P<0.0

9、5)；（2）膿毒癥ARDS大鼠血漿硫化氫水平與肺泡灌洗液蛋白濃度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.817,P<0.05)；（3）膿毒癥ARDS大鼠血漿硫化氫水平與肺組織伊文氏藍(lán)含量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.854,P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.H2S參與膿毒癥ARDS肺血管通透性調(diào)節(jié)，其降低導(dǎo)致血管通透性增加，補(bǔ)充外源性硫化氫，可以改善膿毒癥ARDS肺血管通透性。
　　2.烏司他丁具有多種抗炎機(jī)制，其亦可以通過(guò)改變H2S水平來(lái)影響