血管生成素-1對膿毒癥小鼠肺血管通透性的影響.pdf

1、[目的]
　　 1、觀察補(bǔ)充血管生成素-1(Ang-1)后小鼠體內(nèi)Ang-1、Ang-2水平和Ang-2/Ang-1比值、小鼠肺濕干比、肺通透指數(shù)以及病理學(xué)等變化，探討外源性Ang-1對膿毒癥的治療作用。
　　 2、觀察補(bǔ)充Ang-1后小鼠血漿和肺組織中血管內(nèi)皮鈣粘蛋白(VE-cadherin)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的變化，并觀察予Ly294002阻斷磷脂酰肌醇-3磷酸/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

2、后VE-cadherin功能及表達(dá)變化，初步探討Ang-1改善肺血管通透性的作用機(jī)制。
　　 [方法]
　　 通過腹腔注射(i.p.)脂多糖(LPS)制作膿毒癥ALI小鼠模型。6-8周齡SPF級雄性BALB/c小鼠96只，隨機(jī)分生理鹽水組(A組)、LPS(5mg/kg，i.p.)組(B組)、LPS+Ang-1(500μg/kg，i.p.)組(C組)、LPS+Ang-1+Ly(5 mg/kg，i.v.)組(D組)、Ang-

3、1組(E組)、Ly組(F組)，每組16只。各組經(jīng)處理12h后，隨機(jī)取8只小鼠進(jìn)行心臟采血分離血漿，ELISA法測Ang-1、Ang-2、VE-cadherin濃度；取左肺行肺濕干比(WW/DW)測定；同時(shí)取右中肺葉組織觀察肺組織病理變化；并取其余右肺用免疫印跡法檢測VE-cadherin、VEGF蛋白表達(dá)，免疫沉淀法檢測磷酸化VE-cadherin蛋白表達(dá)。每組另8只小鼠，心臟采血分離血漿，并行支氣管肺泡灌洗收集灌洗液(BALF)，自動

4、生化分析儀測定血漿、BALF的總蛋白濃度并計(jì)算肺通透指數(shù)(LPI)，ELISA法測血漿、BALF的VEGF濃度。應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 [結(jié)果]
　　 1、各組小鼠血漿Ang-1、Ang-2水平及Ang-2/Ang-1比值血漿Ang-1水平：與A組相比較，B、C、D組明顯降低(P<0.01)，E組明顯升高(P<0.05)，F(xiàn)組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與B組相比較，C、D組明顯升高(P<0.0

5、1)；與C組相比較，D組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血漿Ang-2水平：與A組相比較，B、C、D組明顯升高(P<0.01)，E、F組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與B組相比較，C、D組明顯降低(P<0.01，P<0.05)；與C組相比較，D組明顯升高(P<0.01)。Ang-2/Ang-1比值的變化趨勢與Ang-2水平變化趨勢相同。
　　 2、各組小鼠肺組織肺濕干比(WW/DW)與A組相比較，B、C、D組的肺組織肺濕干比明顯增高(P<0.01，P<0

6、.05，P<0.01)，E、F組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與B組相比較，C、D組明顯降低(P<0.01，P<0.05)；與C組相比較，D組明顯增高(P<0.01)。
　　 3、各組小鼠肺通透指數(shù)(LPI)與A組相比較，B、C、D組的LPI明顯增高(P<0.01)，E、F組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與B組相比較，C、D組明顯降低(P<0.01，P<0.05)；與C組相比較，D組明顯增高(P<0.01)。
　　 4、各組小鼠肺組織HE染色所

7、見A組小鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常，無炎癥細(xì)胞滲出及肺泡水腫；B組觀察到明顯急性炎癥損害及肺水腫嚴(yán)重；C組炎癥損害、肺水腫較B組明顯減輕；D組較C組炎癥損傷加重；E、F組均為正常肺組織表現(xiàn)。
　　 5、各組小鼠血漿VE-cadherin水平及肺組織磷酸化VE-cadherin、總VE-cadherin表達(dá)血漿VE-cadherin水平：與A組相比較，B、C、D組明顯增高(P<0.01)，E、F組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與B組相比較，C、D組明顯

8、降低(P<0.01)；與C組相比較，D組明顯增高(P<0.01)。肺組織磷酸化VE-cadherin表達(dá)的變化趨勢與血漿VE-cadherin水平變化趨勢相同。肺組織總VE-cadherin表達(dá)：與A組相比較，B、C、D組明顯降低(P<0.01，P<0.05，P<0.01)，E、F組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與B組相比較，C、D組明顯升高(P<0.01，P<0.05)；與C組相比較，D組明顯降低(P<0.05)。
　　 6、各組小鼠血漿

9、、BALF及肺組織的VEGF表達(dá)血漿VEGF水平：與A組相比較，B、C、D組明顯增高(P<0.01，P<0.05，P<0.01)，E、F組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與B組相比較，C、D組明顯降低(P<0.01)；與C組相比較，D組明顯增高(P<0.01)。BALF的VEGF水平：與A組相比較，B、C、D組明顯降低(P<0.01)，E、F組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與B組相比較，C、D組明顯升高(P<0.01，P<0.05)；與C組相比較，D組明顯降低(

10、P<0.05)。肺組織的VEGF蛋白表達(dá)變化趨勢與BALF的VEGF水平變化趨勢相同。
　　 7、小鼠血漿Ang-2/Ang-1比值與肺組織干濕比的相關(guān)關(guān)系直線相關(guān)分析顯示小鼠血漿Ang-2/Ang-1比值與肺組織干濕比顯著相關(guān)(r=0.73，P<0.01)。
　　 [結(jié)論]
　　 1、膿毒癥小鼠血漿Ang-2水平及Ang-2/Ang-1比值明顯升高，Ang-2/Ang-1比值與肺血管通透性顯著相關(guān)；補(bǔ)充Ang-

11、1能降低膿毒癥小鼠血漿Ang-2水平及Ang-2/Ang-1比值。
　　 2、補(bǔ)充Ang-1能有效降低膿毒癥小鼠肺血管通透性，減輕肺水腫。
　　 3、補(bǔ)充Ang-1通過減少膿毒癥小鼠肺組織VE-cadherin磷酸化、斷裂及丟失入血而降低血漿VE-cadherin水平，并增加VE-cadherin在肺組織的表達(dá)，從而改善肺血管內(nèi)皮的滲漏。
　　 4、Ang-1通過PI3K/Akt信號通路調(diào)節(jié)VE-cadherin