孕期炎癥暴露對子代大鼠DOCA-salt刺激時血壓的影響及機制研究.pdf

1、心血管疾病(Cardiovascular disease，CVD)的發(fā)病率和死亡率在全世界范圍內(nèi)位居首位，且呈現(xiàn)逐年上升趨勢。作為心血管疾病的最主要危險因素，成年人高血壓的發(fā)生率約為22％，每年導(dǎo)致全世界約940萬人死亡。除了傳統(tǒng)認(rèn)識上的心血管疾病致病因素如吸煙、酗酒及不健康飲食等，生命早期不利因素暴露對子代成年后心血管疾病的發(fā)生有著重要影響。臨床流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)也提示孕期的炎癥免疫刺激可能與子代高血壓發(fā)生有關(guān)。因此，理解孕期不利刺激導(dǎo)

2、致高血壓發(fā)生的機制可以為降低高血壓的發(fā)病率提供新的干預(yù)策略。我們課題組前期通過給予孕期SD大鼠脂多糖(LPS)或是酵母多糖刺激，建立了一個穩(wěn)定的孕期炎癥致子代高血壓發(fā)生的動物模型，盡管發(fā)現(xiàn)子代大鼠腎臟局部腎素-血管緊張素系統(tǒng)過度激活以及在高血壓發(fā)生前就出現(xiàn)血管重構(gòu)，但是進(jìn)一步的機制尚不十分清楚。
　　目的:
　　原發(fā)性高血壓的發(fā)生除了遺傳因素外，血容量的增加是主要的因素之一。鹽的過量食用增加心血管疾病和高血壓的發(fā)病率，給予動

3、物高鹽以增加血容量是原發(fā)性高血壓常見的動物模型。此外，流行病學(xué)研究表明5-18％的普通高血壓病人以及14-21％難治性高血壓病人同時患有原發(fā)性醛固酮增多癥。由于不同人群對高血壓危險因素的敏感性存在顯著的差異性，因此我們給與孕期炎癥暴露子代大鼠醛固酮類似物-醋酸脫氧皮質(zhì)酮(DOCA)結(jié)合高鹽(DOCA-salt)刺激，考察孕期炎癥暴露后子代高血壓的敏感性及可能機制，以此探討孕期炎癥暴露是否可以作為人類高血壓發(fā)生率居高不下的重要危險因素及可

4、能的防治策略。
　　方法和結(jié)果:
　　1.孕期炎癥暴露炎癥暴露對子代大鼠DOCA-salt刺激血壓及血管結(jié)構(gòu)的影響
　　1.1 孕期炎癥暴露炎癥暴露導(dǎo)致子代大鼠DOCA-salt刺激時血壓明顯升高
　　SD孕鼠在孕第8、10和12天腹腔注射LPS(0.79 mg/kg)或生理鹽水，子代大鼠16w周齡時給予DOCA-salt處理4周。與對照相比，孕期炎癥暴露炎癥暴露子代大鼠DOCA-salt處理1周后，血壓明顯升高

5、，而且持續(xù)上升。但是正常子代大鼠DOCA-salt處理1周后血壓只有輕微的增加，直到DOCA-salt處理第4周才有明顯的差異。值得注意的是，DOCA-salt處理4周后，孕期炎癥暴露炎癥暴露子代大鼠血壓升高的幅度明顯大于正常子代大鼠。
　　1.2 孕期炎癥暴露導(dǎo)致子代大鼠DOCA-salt刺激后血管損傷加重
　　HE染色表明孕期炎癥暴露子代大鼠DOCA-salt刺激后胸主動脈血管壁明顯增厚，血管橫截面積、管壁和內(nèi)腔的比值明

6、顯增大，與正常子代大鼠相比，孕期炎癥暴露子代大鼠DOCA-salt刺激后胸主動脈血管壁明顯增厚和血管橫截面積明顯增大。Vehicle處理組孕期炎癥暴露和正常子代大鼠胸主動脈p-eNOS表達(dá)沒有差異，而DOCA-salt刺激后，孕期炎癥暴露子代大鼠胸主動脈p-eNOS表達(dá)水平明顯低于正常子代大鼠及內(nèi)皮層不完整這提示內(nèi)皮損傷加重。
　　1.3 孕期炎癥暴露導(dǎo)致子代大鼠DOCA-salt刺激時炎癥水平明顯增加
　　DOCA-sal

7、t刺激4周后，孕期炎癥暴露導(dǎo)致子代大鼠胸主動脈血管ICAM-1、VCAM-1、 IL-1β、 IL-6和TNF-α mRNA表達(dá)水平明顯增加，而正常子代大鼠炎癥因子的水平?jīng)]有明顯變化。
　　2.氧化應(yīng)激在孕期炎癥暴露子代大鼠DOCA-salt刺激后血壓增高和血管損傷加重中的作用
　　2.1 孕期炎癥暴露導(dǎo)致子代大鼠DOCA-salt刺激時胸主動脈發(fā)生氧化應(yīng)激
　　DHE染色表明，vehicle處理組孕期炎癥暴露和正常子

8、代大鼠胸主動脈O2-水平?jīng)]有差異，而且正常子代大鼠DOCA-salt刺激后O2-水平也沒有明顯增加。但是DOCA-salt刺激后，孕期炎癥暴露子代大鼠胸主動脈O2-水平明顯高于正常子代大鼠。
　　2.2 孕期炎癥暴露導(dǎo)致子代大鼠DOCA-salt刺激時抗氧化酶系統(tǒng)受到損傷
　　DOCA-salt刺激后正常子代大鼠和孕期炎癥暴露子代大鼠胸主動GPx1、Hmox1和Prdx3 mRNA水平?jīng)]有明顯變化，但是孕期炎癥暴露子代大鼠D

9、OCA-salt刺激后SOD1和SOD3 mRNA水平明顯降低，而SOD1和SOD3mRNA在正常子代大鼠DOCA-salt刺激后則沒有變化。同時，正常子代大鼠DOCA-salt刺激后UCP2和Prdx5表達(dá)明顯增加，而在孕期炎癥子代大鼠DOCA-salt刺激后則沒有變化。
　　2.3 抗氧化劑NAC可以降低孕期炎癥暴露子代大鼠DOCA-salt導(dǎo)致的血壓升高和血管損傷并增加p-eNOS的表達(dá)
　　NAC可以顯著降低孕期炎癥

10、暴露子代大鼠DOCA-salt導(dǎo)致的孕期炎癥暴露導(dǎo)致子代大鼠血壓升高，而且可以增加p-eNOS的表達(dá)同時抑制DOCA-salt導(dǎo)致的血管壁增厚，橫截面積和管壁和內(nèi)腔比值的增大。
　　3.孕期炎癥暴露子代大鼠DOCA-salt刺激所致氧化應(yīng)激的機制研究
　　3.1 孕期炎癥暴露降低子代胸主動脈DOCA-salt刺激時PGC-1α的恢復(fù)能力
　　正常子代大鼠DOCA-salt處理3天后，胸主動脈PGC-1α的蛋白表達(dá)明顯下

11、降，7d后恢復(fù)正常;但是孕期炎癥暴露子代大鼠DOCA-salt處理7d后則沒有恢復(fù)，而是繼續(xù)呈現(xiàn)下降趨勢。同樣地，DOCA-salt處理4周后，正常子代大鼠PGC-1α的蛋白表達(dá)明顯增加，而孕期炎癥暴露子代大鼠卻沒有明顯變化。值得注意的是，在Vehicle組，孕期炎癥暴露子代大鼠PGC-1α的蛋白表達(dá)明顯高于正常子代大鼠。
　　3.2 孕期炎癥暴露導(dǎo)致子代大鼠胸主動脈DOCA-salt刺激后AMPK和NF-κ B通路失衡
　

12、　正常子代大鼠DOCA-salt處理3天后，胸主動脈p-AMPKThr172水平明顯下降，7d后恢復(fù)正常;而p-p65Ser536則呈相反的趨勢。然而在孕期炎癥暴露子代大鼠中DOCA-salt處理后p-p65Ser536水平持續(xù)的增加。DOCA-salt處理4周后，正常子代大鼠和孕期炎癥暴露子代大鼠胸主動脈p-AMPKThr172的蛋白表達(dá)趨勢和PGC-1α一致，而DOCA-salt處理4周后，孕期炎癥暴露子代大鼠胸主動脈p-p65Se

13、r536水平明顯高于正常子代大鼠。
　　3.3 抑制NF-κB的過度激活可以促進(jìn)孕期炎癥暴露子代大鼠PGC-1α的快速恢復(fù)以及抑制DOCA-salt引起的血壓升高
　　NF-κB抑制劑TPCK可以降低正常子代大鼠和孕期炎癥暴露子代大鼠DOCA-salt處理后p-p65Ser536的水平，促進(jìn)孕期炎癥暴露子代大鼠PGC-1α的快速恢復(fù)以及UCP2、SOD1和SOD3的表達(dá)。此外，TPCK還可以抑制DOCA-salt引起的血壓升

14、高。
　　結(jié)論
　　1.孕期LPS暴露導(dǎo)致子代對醛固酮及鹽的敏感性增加;
　　2.抗氧化能力的降低是孕期炎癥暴露子代血壓敏感性增加的原因之一;
　　3.NF-κB/AMPK失衡抑制PGC-1α的表達(dá)可能是導(dǎo)致孕期炎癥暴露子代抗氧化能力降低的機制。
　　總之，這項研究建立了一個新的DOCA-salt刺激模型有助于研究孕期炎癥暴露導(dǎo)致子代高血壓發(fā)生的機制。孕期炎癥刺激致使機體一直處于代償狀態(tài)，當(dāng)遭受再次刺激時機