丁基苯酞對1型糖尿病肝損傷大鼠Nrf2-ARE信號通路的影響.pdf

1、糖尿病肝損傷是指糖尿病引起的肝臟組織學(xué)和功能學(xué)的異常改變，屬于糖尿病的慢性并發(fā)癥，多發(fā)于2型糖尿病(T2DM)。糖尿病肝損傷常有以下病理學(xué)表現(xiàn):(1)肝糖原累積;(2)脂肪肝:肝細胞內(nèi)出現(xiàn)脂滴，多為輕度脂肪變性;(3)肝硬化:糖尿病并發(fā)肝硬變發(fā)生率較低，早期肝損傷甚至輕度脂肪變性時即可見膠原纖維增生;(4)非特異性細胞變性如肝細胞嗜酸性變等;(5)微血管病變、脂肪肉芽腫等改變。
　　近年來隨著對糖尿病并發(fā)癥研究的不斷深入，其發(fā)病機

2、制有包括:多元醇通路活性增高、晚期糖基化終末產(chǎn)物生成增多、蛋白激酶C激活、己糖胺通路活性增高。Brownlee教授等學(xué)者認為，糖尿病并發(fā)癥的中心機制為“氧化應(yīng)激”，即高糖引起活性氧生成過多最終導(dǎo)致糖尿病微血管損傷。作為機體最重要的抗氧化通路，Nrf2-ARE信號通路調(diào)控編碼抗氧化蛋白，并可抑制脂質(zhì)沉積，增強肝細胞解毒和抗氧化能力。當機體暴露于活性氧族(ROS)時，Nrf2與ARE結(jié)合，調(diào)控下游抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶（如過氧化氫酶、硫氧還蛋

3、白還原酶、血紅素氧合酶-1等）的表達從而抵御氧化應(yīng)激。而此通路在糖尿病肝損傷機制的研究未見報道。
　　丁基苯酞（恩必普）為我國臨床常用治療腦血管類疾病的藥物，可有效改善腦組織缺血再灌注引起的氧化應(yīng)激，具有抑制谷氨酸釋放，降低細胞內(nèi)鈣濃度，抑制自由基和提高抗氧化酶活性等作用。但其應(yīng)用于糖尿病肝損傷方面研究國內(nèi)外尚未見報道。
　　目的:本實驗通過應(yīng)用丁基苯酞對糖尿病肝損傷模型大鼠進行干預(yù)，觀察氧化應(yīng)激水平及Nrf2通路變化，探討

4、氧化應(yīng)激在糖尿病肝損傷中的作用以及丁基苯酞可能的治療機制。
　　方法:60只健康雄性SD大鼠，隨機分為對照組(Control)、糖尿病模型組(DM)、丁基苯酞組(NBP)。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，除對照組外，余大鼠組腹腔注射1％STZ（60mg/kg），對照組腹腔注射相當劑量枸櫞酸緩沖液，72h后連續(xù)3次尾靜脈取血測血糖，以≥16.7 mmol/L為DM造模成功標準。造模成功后，正常組給予相當劑量的飲用水灌胃，模型組給予相當劑量的玉米油

5、灌胃，丁基苯酞組按80mg/kg灌胃，總共12周。于后12周末，禁食12h，麻醉狀態(tài)下稱重，股動脈取血，分離血清，測定ALT、AST、GLU、TG、TC、HDL、LDL、MDA、T-SOD;摘取肝臟，留取部分組織置于4％多聚甲醛固定液，PAS染色觀察大鼠肝臟糖原分布，F(xiàn)n免疫組化半定量細胞外基質(zhì)水平;留取肝組織置于PBS中漂洗后液氮速凍，-80℃低溫冰箱長期保存，用于檢測肝組織MDA含量、T-SOD活力，Western Blot法檢測肝

6、臟Nrf2、HO-1、Catalase的表達及分布情況。
　　結(jié)果:
　　1、實驗大鼠的一般狀況
　　實驗過程中除對照組外，其余兩組均有死亡情況，其中模型組死亡10只，丁基苯酞組死亡8只，死亡原因可能與長期高血糖引起的酮癥酸中毒及各臟器功能紊亂衰竭有關(guān)，丁基苯酞組不排除個別大鼠因?qū)λ幬锂a(chǎn)生的毒性不耐受而死亡。對照組大鼠體重呈進行性增長，反應(yīng)靈敏，毛色有光澤，糞便呈麥粒樣，尿量、飲水量正常，飲食正常。其余各組大鼠腹腔注射

7、STZ后，多尿多飲多食癥狀明顯，并逐漸表現(xiàn)出體重減輕，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，毛色暗淡無光澤，便溏。
　　2、各組大鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)改變
　　PAS糖原染色可見正常組大鼠肝細胞胞質(zhì)內(nèi)散在紫紅色糖原顆粒，分布較均勻，界限清楚，染色深。模型組大鼠糖原顆粒含量明顯減少，分布稀疏、不均勻。丁基苯酞組大鼠糖原含量明顯增多且分布均勻。
　　3、各組大鼠血清ALT、AST、GLU、TC、TG、LDL、HDL含量
　　各組大鼠血清A

8、LT、AST、GLU、TC、TG、LDL含量結(jié)果顯示:與對照組相比，模型組、丁基苯酞組大鼠血清明顯升高(P＜0.05);與模型組相比，丁基苯酞組大鼠血清以上指標明顯降低(P＜0.05)。
　　各組大鼠血清HDL含量結(jié)果顯示:與對照組相比，模型組、丁基苯酞組大鼠血清HDL明顯降低(P＜0.05);與模型組相比，丁基苯酞組大鼠血清HDL明顯升高(P＜0.05)。
　　4、各組大鼠血清及肝臟組織MDA含量及T-SOD活力
　

9、　各組大鼠血清及肝組織MDA含量結(jié)果顯示:與對照組相比，模型組、丁基苯酞組大鼠明顯升高(P＜0.05);與模型組相比，丁基苯酞組大鼠明顯降低（P＜0.05）。
　　各組大鼠血清及肝組織T-SOD含量結(jié)果顯示:與對照組相比，模型組、丁基苯酞組大鼠明顯升高(P＜0.05);與模型組相比，丁基苯酞組大鼠明顯升高(P＜0.05)。
　　5、各組大鼠肝組織Nrf2、HO-1、Catalase、Fn的表達水平
　?、倜庖呓M化示:N

10、rf2蛋白陽性表達于肝細胞核中，同對照組相比，糖尿病組Nrf2在胞核內(nèi)表達明顯增強，丁基苯酞組尤為突出(P＜0.05); HO-1、Catalase作為Nrf2下游的兩個抗氧化蛋白，在三組動物肝細胞胞質(zhì)中均有表達，而丁基苯酞組表達較高(P＜0.05）。對照組Fn于中央靜脈及匯管區(qū)少有分布，同期模型組表達較高，丁基苯酞組Fn表達明顯減少(P＜0.05）。
　　②Westem Blot提示:各組大鼠肝組織Nrf2水平結(jié)果顯示，同對照組

11、相比，模型組和丁基苯酞組肝臟細胞核表達較高(P＜0.05);同模型組相比，丁基苯酞組明顯升高(P＜0.05)。
　　各組大鼠肝組織HO-1、Catalase水平結(jié)果顯示，同對照組相比，模型組和丁基苯酞組肝臟細胞核表達較高(P＜0.05);同模型組相比，丁基苯酞組明顯升高(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、1型糖尿病肝損傷大鼠存在糖脂代謝紊亂及肝功能異常。
　　2、氧化應(yīng)激參與糖尿病肝損傷的發(fā)病機制。