NogoA-PirB通路對(duì)腦出血大鼠軸突再生和神經(jīng)功能的影響.pdf

1、目的：通過構(gòu)建大鼠腦出血模型，觀察NogoA和PirB兩種蛋白在腦出血大鼠腦組織中不同時(shí)間點(diǎn)的定量表達(dá)、PirB表達(dá)的時(shí)空特點(diǎn)、軸突再生情況、大鼠神經(jīng)功能缺損情況，探討PirB的表達(dá)對(duì)腦出血損傷大鼠軸突再生和神經(jīng)功能的影響、NogoA和PirB蛋白表達(dá)的相關(guān)性，推測(cè)NogoA-PirB通路與神經(jīng)功能缺損的相關(guān)性，探討腦出血損傷后腦組織的修復(fù)機(jī)制，進(jìn)一步探索腦出血后治療靶點(diǎn)，為臨床治療研究提供理論依據(jù)。
　　方法：雄性SD大鼠75只

2、，隨機(jī)分為假手術(shù)（Sham）組（n=25）和腦出血（ICH）組（n=50），兩組分別按斷頭取腦時(shí)間點(diǎn)不同分為1d、3d、7d、14d、28d共5個(gè)亞組，各時(shí)間點(diǎn)腦出血大鼠隨機(jī)分為Western Blot組和組織免疫熒光組。Sham組大鼠顱骨鉆孔后不注射血液，腦出血組以大鼠自體鼠尾動(dòng)脈不凝血50ul，經(jīng)改良二次注入法建立大鼠腦出血模型，術(shù)后3小時(shí)通過神經(jīng)功能評(píng)分判定造模成功與否。造模成功后，各時(shí)間點(diǎn)大鼠采用Garcia神經(jīng)功能障礙評(píng)分方法

3、進(jìn)行評(píng)分后斷頭取腦。Western Blot組腦組織取出后立即液氮冷凍，隨后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱凍存?zhèn)溆?，研磨組織提取蛋白后，采用蛋白免疫印跡法（Western-blot）測(cè)定PirB和NogoA蛋白的表達(dá)；組織免疫熒光組大鼠深度麻醉后予以PBS和4％多聚甲醛灌注后取腦，取出腦組織經(jīng)后續(xù)處理后行石蠟切片和冰凍切片，分別行HE染色和免疫熒光。
　　結(jié)果：（1）、腦出血組神經(jīng)功能缺失評(píng)分明顯低于對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)Sham組，以3d組神經(jīng)功能缺失評(píng)

4、分最低，以上結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)差異具有顯著性(P<0.05)。（2）腦組織形態(tài)結(jié)構(gòu)改變：Sham組腦組織中可見神經(jīng)細(xì)胞完整。腦出血組1d亞組病灶內(nèi)充滿紅細(xì)胞，病灶周圍水腫明顯伴少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；3d亞組血腫紅細(xì)胞減少，病灶周圍神經(jīng)元腫脹壞死明顯，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；7d亞組血腫進(jìn)一步吸收，周圍水腫有所減輕，炎細(xì)胞減少，膠質(zhì)細(xì)胞大量增生；14d、28d亞組血腫吸收，見明顯膠原纖維增生及修復(fù)瘢痕。（3）NogoA和PirB定量分析：腦出血組各時(shí)間點(diǎn)Nog

5、oA、PirB表達(dá)均高于對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的Sham組；二者在腦出血后表達(dá)明顯增加，并在腦出血后7天達(dá)到表達(dá)高峰，持續(xù)高水平表達(dá)至28d，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。（4）、雙標(biāo)免疫熒光：PirB在腦出血組各時(shí)間點(diǎn)均有表達(dá)，主要表達(dá)在神經(jīng)元細(xì)胞、軸突及星形膠質(zhì)細(xì)胞；腦出血組出現(xiàn)明顯軸突斷裂、紊亂等損傷表現(xiàn)，軸突長(zhǎng)度較正常對(duì)照組明顯縮短，持續(xù)至腦出血后28天無明顯改善，與Sham組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（5）、腦出血組各時(shí)間