鐵調(diào)素對腦出血后鐵代謝及神經(jīng)功能預(yù)后影響的研究.pdf

1、目的:
　　腦出血指非外傷性腦內(nèi)血管破裂導(dǎo)致自發(fā)溢出的血液進(jìn)入大腦實(shí)質(zhì)，伴或不伴有血液滲入蛛網(wǎng)膜下腔或腦室。因其高致死率和高致殘率，是極為兇險(xiǎn)的一種卒中類型，也成為一個(gè)重大的公共健康問題。
　　腦出血后腦損傷機(jī)制錯(cuò)綜復(fù)雜，目前除支持治療外，缺乏有效的治療方法。近期研究顯示，紅細(xì)胞裂解及血紅蛋白降解釋放出大量自由鐵與腦出血后遲發(fā)型腦損傷有關(guān)。大量臨床前研究顯示鐵螯合劑去鐵胺能減輕血紅蛋白或鐵介導(dǎo)的神經(jīng)毒性，改善腦出血后神經(jīng)功能

2、。然而，去鐵胺血腦屏障通透性較低及長時(shí)間使用可造成腎臟損害，并且根據(jù)我們對腦鐵代謝的理解和前期關(guān)于鐵調(diào)素的研究，我們相信鐵調(diào)素是腦出血后降鐵治療的更好選擇。我們證實(shí)增加腦內(nèi)鐵調(diào)素濃度或表達(dá)能減少腦出血后腦鐵過載，從而改善神經(jīng)功能預(yù)后。
　　方法:
　　為證實(shí)我們的假設(shè)
　　1、通過大鼠自體血注射腦出血模型檢測了鐵調(diào)素對腦出血后大鼠不同腦區(qū)腦鐵濃度、腦內(nèi)鐵代謝相關(guān)蛋白表達(dá)以及神經(jīng)功能預(yù)后的影響。腦出血造模后第1、3、7、

3、14和28天通過TUNEL染色評估細(xì)胞凋亡程度、通過Fluoro-Jade B染色評估神經(jīng)元變性情況，在造模后第28天通過NeuN免疫熒光判斷神經(jīng)元存活情況。腦出血造模后第1、3、7、14和28天通過前肢上抬實(shí)驗(yàn)、前肢使用不協(xié)調(diào)實(shí)驗(yàn)和角落轉(zhuǎn)身實(shí)驗(yàn)評估運(yùn)動(dòng)功能，造模后第28天通過Morris水迷宮評估認(rèn)知功能。
　　2、檢測鐵調(diào)素對Hemin處理的原代皮層神經(jīng)元（離體出血模型）的細(xì)胞保護(hù)作用，以及鐵代謝相關(guān)蛋白表達(dá)變化。
　　

4、3、同時(shí)還從臨床病例及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩個(gè)層次檢測了腦出血后腦脊液鐵以及血清鐵、轉(zhuǎn)鐵蛋白、鐵蛋白的變化，檢測了腦出血后不同腦區(qū)鐵及鐵相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1.臨床試驗(yàn)顯示，第1天（基線）卒中嚴(yán)重程度高、低血小板水平、血腫位置深、幕下出血和出血破入腦室與臨床預(yù)后不良相關(guān);證實(shí)血清鐵蛋白含量與相對水腫體積可以預(yù)測腦出血患者臨床預(yù)后;結(jié)果還顯示，血清鐵蛋白升高以及血清鐵和轉(zhuǎn)鐵蛋白降低與腦出血患者血腫體積和功能預(yù)后呈相關(guān)性;

5、腦室內(nèi)出血、血腫體積和外科干預(yù)在腦出血后不同階段對血清鐵、鐵蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和銅藍(lán)蛋白含量有著不同影響;
　　2.Ad-Hepcidin通過抑制鐵代謝相關(guān)蛋白表達(dá)，從而降低腦出血后腦鐵過載
　　與假手術(shù)組比較，腦出血引起皮層、海馬、紋狀體及腦脊液鐵水平顯著升高，在第7-14天達(dá)到高峰，直至第28天仍高于對照組;鐵調(diào)素治療可以顯著降低腦出血引起的腦鐵水平升高。腦出血造模后，第1-14天血清鐵明顯低于假手術(shù)組，第28天高于假手術(shù)組

6、，而Ad-Hepcidin干預(yù)可以逆轉(zhuǎn)腦出血后血清鐵變化。Ad-Hepcidin可以顯著抑制鐵代謝相關(guān)蛋白DMT1、TfR1、Fpn1、Ft-L和Ft-H的表達(dá)，從而減少神經(jīng)元對鐵的攝取。
　　3.Ad-Hepcidin減輕腦出血后上調(diào)的自噬水平。
　　Ad-Hepcidin顯著下調(diào)自噬標(biāo)記蛋白LC3的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)自噬負(fù)向標(biāo)記蛋白P62的表達(dá)，減輕腦出血后自噬。
　　4.Ad-Hepcidin能減輕腦出血或血紅素導(dǎo)致

7、的神經(jīng)損傷。
　　血紅素處理皮層神經(jīng)元，引起細(xì)胞LDH釋放增加，Ad-Hepcidin和鐵調(diào)素肽能明顯減少神經(jīng)元LDH釋放。腦出血后出現(xiàn)明顯腦水腫，而Ad-Hepcidin能明顯減輕第3、7、14和28天的腦水腫程度。Ad-Hepcidin顯著減少腦出血造成的神經(jīng)元丟失，減輕細(xì)胞凋亡和神經(jīng)元變性。Ad-Hepcidin顯著改善腦出血后的神經(jīng)功能障礙。
　　結(jié)論:
　　腦出血后腦鐵水平顯著升高。組織損傷的程度和時(shí)間進(jìn)程與