IL-12、IL-23在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的作用.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  研究白介素-12及白介素-23在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)患者基因和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平,并分析其血清水平與 RA病情活動(dòng)性的關(guān)系,探討IL-12、IL-23在體外培養(yǎng)體系中對(duì)與RA炎性進(jìn)程和關(guān)節(jié)破壞關(guān)系密切的炎性細(xì)胞因子的影響,進(jìn)一步了解RA的發(fā)病機(jī)制,從而為治療RA提供一種新的途徑。
  方法:
  1.選取臨床確診的未經(jīng)糖皮質(zhì)激素治療的RA患者86例,同時(shí)隨機(jī)性抽取1

2、02例健康體檢人群作為對(duì)照組。對(duì)RA研究對(duì)象的分組依據(jù)疾病活動(dòng)程度分為活動(dòng)組和緩解組,標(biāo)準(zhǔn)依照 DAS28評(píng)分方法,DAS28>2.6分歸于活動(dòng)組,DAS28≤2.6分歸入緩解組。
  2.用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)IL-12和IL-23在RA患者及正常對(duì)照組外周血上清中的水平,并與RA患者的血沉(ESR)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(anti-CCP)、類風(fēng)濕因子(RF)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)及關(guān)節(jié)Ri

3、tchie指數(shù)、DAS評(píng)分等指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。
  3.運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR法)檢測(cè) IL-12p40,IL-12p35和IL-23p19 mRNA在RA緩解組、活動(dòng)組和正常對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中的表達(dá),并分別比較各組表達(dá)量的差異。
  4.用密度梯度離心法分離RA患者和正常人的PBMCs,加或不加SAC刺激48小時(shí),ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清中IL-12和IL-23的濃度。
  5.

4、用密度梯度離心法分離RA患者和正常人的PBMCs,用抗CD3和CD28單克隆抗體刺激的同時(shí)加入或不加rIL-12或rIL-23,刺激72小時(shí),ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清中IFN-γ和IL-4的濃度。
  結(jié)果:
  1.與正常對(duì)照組的IL-12含量(24.71±3.63pg/ml)比較,RA患者血清中IL-12的含量(緩解組34.54±13.96pg/ml,活動(dòng)組49.52±16.27pg/ml)顯著升高(P<0.05,P<0

5、.05);血清IL-12水平與ESR、RF、DAS28呈顯著正相關(guān)(P<0.05,P<0.05,P<0.05);與RA患者X線Ⅰ期IL-12水平(24.53±18.91 pg/ml)相比較,Ⅱ期(30.56±15.62 pg/ml)、Ⅲ期(38.51±13.93 pg/ml)、Ⅳ期(45.56±16.24 pg/ml)的IL-12水平顯著升高(P<0.05,P<0.05,P<0.05),而且與Ⅱ期IL-12水平比較,Ⅲ期、Ⅳ期IL-12

6、水平顯著增高(P<0.05,P<0.05);RA患者PMBCs中IL-12p40 mRNA的相對(duì)表達(dá)量(48.25±3.39)顯著高于正常對(duì)照組(3.83±0.52),(P<0.05);RA活動(dòng)組的IL-12p40 mRNA相對(duì)表達(dá)量(56.36±6.24)亦顯著高于 RA緩解組(37.24±5.25),(P<0.05)。RA患者PMBCs中IL-12p35 mRNA的相對(duì)表達(dá)量(56.24±5.73)也顯著高于對(duì)照組(4.69±0.3

7、6),(P<0.05),RA活動(dòng)組的IL-12p35 mRNA相對(duì)表達(dá)量(62.48±9.23)顯著高于RA緩解組(48.74±6.98),(P<0.05)。
  2.與正常對(duì)照組的IL-23含量(148.59±27.83pg/ml)比較,RA患者血清中I L-23的含量(緩解組223.55±22.62pg/ml,活動(dòng)組315.76±26.38pg/ml)顯著升高(P<0.05,P<0.05),且活動(dòng)組(315.76±26.38p

8、g/ml)高于緩解組(223.55±22.62pg/ml),(P<0.05);RA患者組血清 IL-23水平與 CRP、ESR、晨僵時(shí)間、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、X線分期比較有顯著相關(guān)性(均為P<0.05)。統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)RA患者的Ⅰ期IL-23水平與Ⅲ期、Ⅳ期的IL-23水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(201.22±30.35pg/mlv299.76±42.35pg/ml,P<0.05;201.22±30.35 pg/mlv337.29±43.

9、25 pg/ml,P<0.05),Ⅱ期IL-23水平與Ⅲ期Ⅳ期比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(222.61±40.59 pg/mlv299.76±42.35 pg/ml,P<0.05;222.61±40.59 pg/mlv337.29±43.25 pg/ml,P<0.05)。RA緩解組的IL-23p19 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于正常組(55.62±0.83v34.45±1.67,P<0.05),RA活動(dòng)組的IL-12p40 mRNA相對(duì)表達(dá)量亦

10、顯著高于R A緩解組(70.35±2.72v55.62±0.83,P<0.05)。
  3.將提取的PBMCs進(jìn)行了體外培養(yǎng)48小時(shí)后收集上清液檢測(cè)IL-12及IL-23水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn),在單純培養(yǎng)基組,RA組IL-12水平顯著高于正常組(33.26±3.14 pg/mlv12.15±2.36 pg/ml,P<0.05),且活動(dòng)組IL-12水平明顯高于緩解組(39.20±5.18 pg/mlv27.23±3.93 pg/ml,P<0

11、.05);RA組IL-23水平亦顯著高于正常組(117.29±10.32 pg/mlv55.29±8.25 pg/ml,P<0.05),且活動(dòng)組IL-23水平明顯高于緩解組(128.62±13.81 pg/mlv106.38±11.72 pg/ml,P<0.05);在SAC培養(yǎng)基組,RA組IL-12水平顯著高于正常組(54.26±7.34pg/mlv30.36±11.34 pg/ml,P<0.05),且活動(dòng)組IL-12水平明顯高于緩解組

12、(58.50±7.92 pg/mlv49.61±9.89 pg/ml,P<0.05);RA組IL-23水平亦顯著高于正常組(266.49±58.37 pg/mlv97.90±27.29 pg/ml,P<0.05),且活動(dòng)組IL-23水平明顯高于緩解組(285.62±69.53 pg/ml v244.22±68.94 pg/ml,P<0.05)。
  4.將提取的PBMCs經(jīng)單克隆抗體(抗CD3和CD28抗體)刺激培養(yǎng)后收集上清液檢

13、測(cè)IFN-γ及IL-4的水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn),RA組上清中IFN-γ水平顯著高于正常組(52.27±9.85pg/mlv22.35±4.26pg/ml,P<0.05),且活動(dòng)組上清中 IFN-γ水平明顯高于緩解組(57.98±16.64pg/mlv48.97±13.63pg/ml,P<0.05);經(jīng) rIL-12刺激后,RA患者和正常人的PBMCs均能產(chǎn)生IFN-γ,并且RA患者無論緩解組還是活動(dòng)組的上清中的IFN-γ均顯著高于正常人(69.

14、82±16.27pg/mlv42.61±6.84 pg/ml,P<0.05;80.72±15.73pg/mlv42.61±6.84pg/ml,P<0.05)。經(jīng) rIL-23刺激的PBMCs也可以產(chǎn)生IFN-γ,并且RA患者無論緩解組還是活動(dòng)組的PBMCs均顯著高于正常人(119.71±23.29pg/mlv78.69±14.85pg/ml,P<0.05;123.75±23.60pg/m1v78.69±14.85pg/ml,P<0.05

15、)。而對(duì)于IL-4的分泌作用,各組間沒有顯著差異(均為P>0.05)。
  結(jié)論:
  RA患者體內(nèi)IL-12及IL-23在基因和蛋白質(zhì)水平均有高表達(dá),且血清IL-12、IL-23水平與RA病情活動(dòng)正相關(guān),提示IL-12、IL-23可能參與了RA的發(fā)病過程,可成為用于監(jiān)測(cè)RA病情活動(dòng)性的指標(biāo)和治療靶點(diǎn); IL-12及IL-23在RA患者Thl/Th2細(xì)胞因子失衡中起到一定的作用,IL-12和IL-23可能是通過促進(jìn)Thl細(xì)胞

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