人類卵母細(xì)胞體外成熟的研究.pdf

1、第一部分：超排卵周期未成熟卵體外培養(yǎng)的研究 目的：研究來源于超排卵周期中的未成熟卵母細(xì)胞，觀察其在TCM-199培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)成熟、受精、胚胎發(fā)育及囊胚形成能力，探討未成熟卵母細(xì)胞體外成熟技術(shù)（IVM）在超排卵周期中的臨床應(yīng)用價值。 方法：選擇在本院進(jìn)行IVF/ICSI-ET并有未成熟卵的57個周期，比較同源體內(nèi)成熟卵與體外培養(yǎng)成熟卵進(jìn)行IVF/ICSI后的正常受精、卵裂、優(yōu)質(zhì)胚胎形成情況和超排卵周期未成熟卵體外培養(yǎng)發(fā)

2、育至囊胚能力。 結(jié)果：未成熟卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)中72.41％的GV期卵和76.08％的MI期卵在36小時內(nèi)達(dá)到成熟，兩組成熟率無明顯差異(P>0.05)。兩組體內(nèi)成熟相比，受精率、卵裂、優(yōu)質(zhì)胚胎形成率、囊胚形成無明顯差異(P>0.05)。體內(nèi)成熟與體外成熟卵相比較，受精率無明顯差異(P>0.05)，但卵裂、優(yōu)質(zhì)胚胎形成率低，差異有顯著性(P<0.05)。未成熟卵母細(xì)胞組經(jīng)體外培養(yǎng)共有13個囊胚培養(yǎng)形成。 結(jié)論：超排卵周期中

3、的未成熟卵，能夠繼續(xù)在體外發(fā)育成熟，受精能力良好。雖然卵裂、優(yōu)質(zhì)胚胎形成率低于體內(nèi)成熟卵，但在同一促排周期增加了可移植胚胎數(shù)。對同一促排周期所獲的未成熟卵行體外成熟培養(yǎng)是可行的，還需進(jìn)一步研究。 第二部分：Roscovitine對人卵母細(xì)胞紡錘體及染色體形態(tài)的影響 目的：觀察200μmol/L Roscovitine對人未成熟卵母細(xì)胞體外成熟后紡錘體及染色體形態(tài)的影響。 方法：選擇在本院進(jìn)行IVF/ICSI-ET

4、 59個周期中所獲未成熟GV期卵母細(xì)胞，所獲得未成熟卵母細(xì)胞隨即分為2組。實驗組未成熟卵母細(xì)胞采用“兩步法”培養(yǎng)，先用200μmol/L Roscovitine培養(yǎng)液培養(yǎng)6小時，然后轉(zhuǎn)入TCM-199培養(yǎng)液培養(yǎng)24～36小時;對照組所獲未成熟卵母細(xì)胞在TCM-199培養(yǎng)液中培養(yǎng)液24～36小時。觀察兩組卵母細(xì)胞體外成熟情況，把MⅡ期成熟卵母細(xì)胞固定染色后制片后應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察培養(yǎng)成熟后MⅡ期卵母細(xì)胞紡綞體和染色體的形態(tài)變化。

5、 結(jié)果：實驗組共獲未成熟卵母細(xì)胞61個，經(jīng)體外成熟培養(yǎng)后50個卵母細(xì)胞成熟，其中39個可觀察到紡錘體與染色體，紡錘體的形態(tài)異常者個15個，染色體異常者11個;對照組共獲未成熟卵母細(xì)胞60個，經(jīng)體外成熟培養(yǎng)成熟后43個培養(yǎng)成熟，其中32個可觀察到染色體與紡錘體，卵母細(xì)胞紡錘體的形態(tài)異常者14個，染色體異常者11個。試驗組的培養(yǎng)成熟率高于對照組（82％，72％），但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，紡錘體和染色體形態(tài)差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義(