戊酸雌二醇調節(jié)ER-α及TGF-β1、MMP9在預防及治療大鼠宮腔粘連中的作用探討.pdf

1、宮腔粘連（intrauterine adhesions，IUA）是指各種原因的創(chuàng)傷，如刮宮、感染、電灼等導致子宮內膜基底層損傷，子宮壁瘢痕愈合，使宮腔和（或）宮頸管腔閉鎖，子宮失去原有生理功能的一種疾病。該病最早于1894年報道，1948年Asherman首次系統(tǒng)的報道了流產和產后刮宮導致的宮腔粘連病例，并將該病命名為“損傷性閉經(traumatical amenorrhea)”。IUA的癥狀主要有閉經、痛經、不孕，即使通過治療后成功自

2、然妊娠，患者于孕期也容易發(fā)生流產、早產、胎盤粘連、產后出血、胎兒宮內發(fā)育遲緩、胎兒畸形等嚴重的產科并發(fā)癥，給患者帶來經濟及心理負擔的同時，也給醫(yī)務工作者帶來了嚴峻的考驗。IUA的發(fā)病原因多為人工流產、早孕及中晚孕期清宮術、宮腔鏡手術等造成。IUA的發(fā)病機制尚不清楚，研究假說眾多，如纖維化增生過度學說、神經反射學說、子宮內膜干細胞分化異常等，研究最為廣泛的當屬纖維化增生過度學說。IUA的病理學改變包括子宮內膜組織纖維化、子宮內膜腺體減少，

3、這與纖維化性疾病相同，把IUA視為纖維化性疾病研究也是IUA治療的重要突破口。IUA的診斷方法主要依靠宮腔鏡檢查，在直視下能全面評估官腔形態(tài)、子宮內膜分布及損傷程度，是診斷IUA的準確方法及首選方法。其他的診斷方法，如子宮輸卵管碘油造影、超聲及MRI檢查的益處不明顯。
　　戊酸雌二醇(estradiol valerate，E2V)是目前宮腔粘連分離術后應用雌激素最常用的雌激素制劑，它是天然雌激素17β-雌二醇的合成酯，20世紀50

4、年代，E2V就已投入臨床應用，目前已成為臨床上最常用的雌二醇制劑。E2V主要應用于治療雌激素低下性疾病、月經紊亂以及子宮內膜損傷性疾病，如卵巢早衰、圍絕經期綜合征、月經不調及IUA等。本研究就是應用E2V作為治療IUA的輔助治療藥物，觀察其治療效果。雌激素受體(estrogen receptors，ERs)是一組廣泛表達于細胞內外的蛋白質，它可以特異性的結合雌激素，使其被激活并轉移至細胞核內，作用于相應的DNA片段，發(fā)揮生物學效應。也有

5、最新研究證實ERs可以不通過與DNA結合而獨立發(fā)揮生物學效應。ERs可以分為兩種類型:核雌激素受體（屬于細胞核內受體家族）和膜雌激素受體（屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族）。核雌激素受體又分為ER-α和ER-β，轉化生長因子-β(TGF-β)是一種多效能細胞生長因子，它發(fā)揮生物學作用前的信息轉導主要通過Smad蛋白家族完成?；|金屬蛋白酶類(MMPs)家族是一組需要金屬元素來催化的蛋白酶，分布廣泛，可由眾多細胞以非活性狀態(tài)合成，由胞外蛋白酶裂解激

6、活后，對細胞外基質成分如膠原蛋白Ⅳ、Ⅴ發(fā)揮降解作用，減少細胞外基質的堆積。因此MMPs的生理作用與TGF-β相反，是一種分解細胞外基質的蛋白酶，可以降解已形成的纖維化組織。
　　目的：
　　本研究采用機械和感染雙重損傷法構建SD大鼠IUA動物模型，再予以不同劑量的E2V在不同時期應用于IUA大鼠模型，通過檢測血清E2濃度、觀察子宮內膜纖維化面積比、子宮內膜腺體計數、子宮內膜TGF-β1、 MMP-9及ER-α的表達等一系列變

7、化，評估雌激素對IUA的預防及治療效果，以期更進一步的指導臨床試驗及臨床應用。
　　方法：
　　1.實驗分組；
　　2.構建大鼠宮腔粘連模型；
　　3.雌激素的劑量換算；
　　4.實驗流程。
　　結果：
　　1.各組大鼠血清雌二醇(E2)濃度結果
　　(1) IUA造模前各組大鼠血清E2濃度比較
　　于IUA造模前剪尾采血測定每組大鼠血清E2濃度，結果顯示:比較8組大鼠血清E2濃度無

8、顯著性差異(F=0.752，P=0.643)，說明造模前各組大鼠內分泌狀況相近。
　　(2)各組大鼠第二次采血血清E2濃度與第一次采血自身濃度比較
　　空白對照組和實驗對照組未予灌胃，24d后再次測定血清E2濃度與造模前比較無顯著性差異（P空白對照組=0.295，P實驗對照組=0.952）;3個雌激素A組于造模當天開始連續(xù)灌胃E2V24d后，測定各組大鼠血清E2濃度，與造模前自身的濃度比較均顯著升高(P＜0.05），各組P值

9、在P=0.002～0.000間，差異明顯;3個雌激素B組造模后第9d開始灌胃雌激素，同樣持續(xù)24d，抽血測定各組大鼠血清E2濃度，與造模前自身的濃度比較亦均顯著升高(P＜0.05)，各組P值在P=0.002～0.000間，差異亦明顯。
　　(3)各組大鼠第二次采血血清E2濃度組間分別比較
　　空白對照組與實驗對照組比較，血清E2濃度無顯著性差異(P=0.240);6個雌激素組分別與2個對照組比較，血清E2濃度顯著升高，均有顯

10、著性差異(P＜0.05)，P值均為0.000。3個雌激素A組間分別比較，隨著灌胃E2V劑量的增加，血清E2濃度亦增加，結果具有顯著性差異(P＜0.05)，中雌A組高于低雌A組，高雌A組高于中雌A組及低雌A組（P值均為0.000）。3個雌激素B組間分別比較，隨著灌胃E2V劑量的增加，血清E2濃度亦增加，結果亦有顯著性差異(P＜0.05），中雌B組高于低雌B組，高雌B組高于中雌B組及低雌B組（P值均為0.000）。灌胃相同劑量E2V的各組大

11、鼠組間比較，低雌A組與低雌B組比較、中雌A組與中雌B組比較、高雌A組與高雌B組比較均無顯著性差異，P值分別為P=0.656、P=0.189、P=0.721。
　　(4)各組大鼠血清E2檢測結果總結
　　灌胃E2V后各組大鼠血清E2濃度的結果比較顯示，各組大鼠血清E2濃度與雌激素灌胃劑量呈正相關關系。
　　2.各組大鼠子宮內膜纖維化面積比結果；
　　3.各組大鼠子宮內膜腺體計數結果；
　　4.各組大鼠子宮內膜

12、TGF-β1表達結果；
　　5.各組大鼠子宮內膜MMP9表達結果；
　　6.各組大鼠子宮內膜ER-α表達結果。
　　結論：
　　1.3個雌激素A組經E2治療后纖維化面積比較實驗對照組降低，腺體計數相對增多，考慮是否與在宮腔創(chuàng)傷初期IUA尚未完全形成時就開始服用雌激素，對大鼠IUA具有一定的預防作用有關;3個雌激素B組纖維化面積和腺體計數均無明顯改善，可能與宮腔創(chuàng)傷后期、粘連程度加重、應用雌激素的時間拖后，治療效果

13、欠佳有關，考慮在這個階段不能單一應用雌激素治療IUA，如能結合TCRA、宮內隔膜、干細胞等綜合性治療應該會增加療效。
　　2.雌激素組中，中、高劑量組的TGF-β1表達水平較低劑量組降低，MMP9表達水平則升高，而中、高組間比較無差異，說明TCRA術后應用中劑量雌激素是最低的有效劑量。
　　3.中、高劑量雌激素組的ER-α表達水平較低劑量雌激素組高，說明雌激素可以誘導ER-α的合成，而中、高劑量組間無差異，說明ER-α的合成