As2O3調節(jié)膀胱癌細胞表達Cx43蛋白及其信號通路的研究.pdf

1、目的：
　　泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤中膀胱尿路上皮癌是最為常見的一種，術后常規(guī)應用膀胱灌注治療預防復發(fā)。目前膀胱癌膀胱灌注化療5年內復發(fā)率較高。因此，研究新的藥物聯(lián)合治療，對提高膀胱癌患者的完全緩解率極其預后有著極其重要的意義。
　　三氧化二砷（Arsenic trioxide，As2O3）是臨床常用的一種抗腫瘤藥物。氧化應激反應是其抗腫瘤的主要作用途徑之一。氧化應激反應可使Cx43半通道開放。近年來研究表明As2O3治療膀胱癌臨床

2、療效確切。其作用機制及信號通路的研究具有重要的臨床意義和科學價值。
　　細胞縫隙連接屬于一種跨膜通道結構，具有通透特性，由兩個細胞縫隙連接蛋白六聚體互相對接形成。其中Cx43在細胞表面表達分布最廣且與腫瘤的關系最密切，在多種惡性腫瘤細胞中Cx43的表達下調與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉移有關。在膀胱癌組織中的研究證實Cx43蛋白在癌旁正常膀胱組織中呈高表達，在膀胱尿路上皮癌細胞中低表達。PKC抑制劑Go6976可使膀胱癌細胞低表達的Cx4

3、3上調，重建細胞縫隙連接，并可抑制腫瘤細胞生長轉移。Cx43的基因突變極少見，其表達及功能的調控主要在轉錄及轉錄后水平進行。在膀胱癌細胞中As2O3調節(jié)膀胱癌細胞Cx43蛋白表達的信號通路，尚未見相關報道。
　　為探討As2O3在膀胱癌治療中的作用機制，我們將選取BIU-87細胞系，體外研究As2O3對Cx43的表達的影響，并進一步探討其是否通過激活p38MAPK、AKT及NF-κB等信號通路調節(jié)Cx43表達。
　　方法：<

4、br>　　1、細胞培養(yǎng):BIU-87細胞用含10％胎牛血清和1％青霉素/鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)基，置于37℃，含5％ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　2、CCK8法檢測BIU-87細胞增殖:不同濃度(0、0.5、1、2.5、5、10、20、30、40 umol/L) AszO3作用BIU-87細胞24、48和72小時，CCK8法檢測As2O3對細胞增殖的影響。應用As2O3最適濃度作用于BIU-87細胞1、1.5、3、6、12和2

5、4小時。
　　3、Western blot檢測As2O3作用BIU-87細胞后Cx43的表達情況。
　　4、Western blot檢測特異性阻斷劑SB230580(10μM)、LY294002(10μM)、PDTC(100μM)分別作用于BIU-87細胞后，As2O3作用于BIU-87細胞后，Cx43的表達情況。
　　5、特異性阻斷劑SB230580(10μM)、LY294002(10μM)、PDTC(100μM)分

6、別作用于BIU-87細胞后，As2O3作用于BIU-87細胞后，Western blot檢測BIU-87細胞AKT的磷酸化情況。
　　結果：
　　1、CCK8法結果顯示，As2O3可抑制腫瘤細胞生長，呈一定濃度時間依賴關系。
　　2、Western blot結果顯示，As2O3作用于BIU-87細胞后，其表達Cx43明顯增加。提前分別加入特異性阻斷劑SB230580(10μM)、LY294002(10μM)、PDTC(

7、100μM)后，As2O3上調Cx43的作用可被LY294002、PDTC阻斷。SB230580組與As2O3組比無明顯差異。
　　3、Western blot結果顯示，特異性阻斷劑SB230580(10μM)、LY294002(10μM)、PDTC(100μM)分別作用于BIU-87細胞后，As2O3作用于BIU-87細胞后，LY294002、PDTC組與As2O3組相比，磷酸化AKT蛋白表達明顯降低。SB230580組與As2