Cx43信號蛋白在法洛四聯(lián)癥兒童心肌細胞中的表達.pdf

1、目的：法洛四聯(lián)癥(tctrology of Fallot,TOF)是一種主要累積右心室的聯(lián)合性先天性心臟血管畸形,為紫紺型先心病中最常見的一種。Cx43信號蛋白在心肌細胞中的異常表達和分布可以引起多種心血管疾病,心臟先天性畸形以及心臟功能的改變。本實驗通過應用免疫組化技術,流式細胞儀技術和共聚焦顯微鏡技術對具有右心室流出道梗阻的法洛四聯(lián)癥患兒的心肌組織與無右心室流出道梗阻的心臟病患兒心肌組織相比較以對Cx43信號蛋白在心肌細胞中的表達和

2、分布加以評價和研究。
　　方法：所有患兒在心臟矯治術中,小心切取右心室流出道的肥厚增生或正常的心肌標本44例。法洛氏四聯(lián)癥患兒切取右室流出道的異常增生心肌肌束并按年齡段分組。其中Ia組患兒18名,年齡段為3月至3歲。Ib組患兒12名,年齡段3歲至6歲。對照組II組14名為無右心室流出道梗阻病變的單純室間隔缺損患兒。采用免疫組化法,流式細胞定量技術以及共聚焦顯微鏡技術檢測和觀察法洛四聯(lián)癥患者的心肌細胞中Cx43信號蛋白的表達水平和三

3、維分布變化,以及與無右心室流出道畸形患者的心肌表達的差異。
　　結果：1.免疫組化研究表明,通過HE染色顯示,實驗組心肌纖維走向紊亂,細胞大小不均,較對照組心肌細胞變大,密度變小;免疫組化結果表明,對照組患兒心肌細胞Cx43顆粒典型地排列在心肌閏盤處,實驗組心肌細胞Cx43顆粒發(fā)生重排,雜亂分布于閏盤、心肌細胞膜各部位和胞漿內。圖像分析結果顯示實驗組Cx43蛋白面積為21.45±7.75,Cx43含量百分比為31.74±10.44

4、,平均灰度72.36±0.43;對照組中Cx43蛋白面積為33.82±8.23,Cx43含量百分比為40.22±10.14,平均灰度99.80±0.53。TOF組Cx43蛋白表達量明顯低于對照組,兩組之間存在顯著性差(P<0.O5)。
　　2.使用流式細胞儀對Cx43蛋白進行定量檢測,以平均熒光強度大小代表Cx43蛋白表達量。實驗組IaCx43蛋白平均熒關強度為87.33±8.4,Ib為101.42±7.9,實驗組平均Cx43蛋白

5、平均熒關強度為95.68±12.6,對照組Cx43蛋白平均熒關強度為133.37±23.9。經t檢驗Ia組與Ib組之間,實驗組與對照組之間均有顯著差異(P<0.05)。
　　3.通過激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),對照組心肌細胞Cx43熒光顆粒呈斑點或帶狀,其排列有高度的規(guī)律性。在心肌纖維的縱切面上,Cx43呈鏈狀分布在與心肌纖維長軸垂直的細胞端-端相接的閏盤部位,極少數(shù)位于與心肌纖維長軸平行的細胞側-側相接的部位;實驗組心肌細胞Cx4

6、3熒光顆粒則發(fā)生重排,部分顆粒已經開始從閏盤處向四周擴散,分布紊亂,出現(xiàn)在整個細胞膜表面各個部位以及細胞胞漿內,甚至表現(xiàn)為不同區(qū)域的增多或減少,一些Cx43顆粒呈鏈狀大量地遷移至細胞側面連接處。
　　結論：1.在法洛四聯(lián)癥患兒的心肌細胞中Cx43信號蛋白其動態(tài)分布和表達均無法按照正常時空調節(jié)機制進行,其在心肌閏盤處表達較少,且各年齡段患兒均出現(xiàn)這種表達和分布雜亂,異常等情況。
　　2.具有右心室流出道梗阻的法洛四聯(lián)癥患兒的心

7、肌組織與無右心室流出道梗阻的心臟病患兒心肌組織中Cx43的表達有明顯不同。右心室流出道梗阻的法洛四聯(lián)癥患兒的心肌組織中Cx43呈雜亂,不成熟性分布。無右心室流出道梗阻的心臟病患兒心肌組織中Cx43表達相對規(guī)律,成熟分布較多。Cx43信號蛋白的雜亂,無序排列可能對右心室結構構型和功能異常產生決定性影響。
　　3.Cx43信號蛋白與心血管系統(tǒng)早期的正常分化與發(fā)育存在密切的聯(lián)系,通過對Cx43的研究有助于從分子生物學水平上探討先心病的發(fā)