PI3K-Akt調(diào)節(jié)Cx43蛋白表達在H2S后處理離體大鼠心肌中的保護作用.pdf

1、目的：探討PI3K/Akt信號通路是否通過調(diào)節(jié)線粒體縫隙連接蛋白Cx43而在硫化氫(H2S)后處理中減輕離體大鼠心臟缺血/再灌注（I/R）損傷。
　　方法：實驗分為兩部分:(1) Cx43在硫化氫后處理心肌保護中的作用。72只♂Sprague Dawley(SD)大鼠隨機分為6組(n=12):空白組（Sham組），缺血/再灌注組（I/R組），溶媒組（DMSO組），抑制劑18β-次甘草酸組（AGA組），硫化氫后處理組（NP組），硫化

2、氫后處理+AGA組（N+A組）。采用離體心臟Langendorff灌注模型，平衡灌注20min后停灌30min復灌60min。記錄平衡末、再灌注30min及灌注60min時的心率(HR)、左室舒張末期壓(LVEDP)、左室發(fā)展壓（LVDP）、左室內(nèi)壓上升最大速率(+dp/dtmax)、左室內(nèi)壓下降最大速率（-dp/dtmax）;灌注結(jié)束時，TTC染色法檢測心肌梗死面積;Western blot半定量線粒體和胞漿總的Cx43(total

3、connexin43，tCx43)和磷酸化Cx43(phosphorylatedconnexin43，pCx43)表達水平。(2) PI3K/Akt調(diào)節(jié)Cx43在硫化氫后處理心肌保護中的作用。56只♂ Sprague Dawley(SD)大鼠隨機分為4組(n=14):缺血/再灌注組（I/R組），PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002組（LY組），硫化氫后處理組（NP組），硫化氫后處理+PI3K/Akt信號通路抑制劑LY29400

4、2組（N+L組）。采用離體心臟Langendorff灌注模型，平衡灌注20min后停灌30min復灌60min。記錄平衡末、再灌注30min及灌注60min時的心率(HR)、左室舒張末期壓(LVEDP)、左室發(fā)展壓（LVDP）、左室內(nèi)壓上升最大速率（+dp/dtmax）、左室內(nèi)壓下降最大速率（-dp/dtmax）;灌注結(jié)束時，TTC法染色心肌切片并計算心肌梗死面積百分比;TUNEL法檢測心肌細胞凋亡計算凋亡指數(shù)（AI）;Western

5、blot半定量線粒體總的Cx43(total connexin43，tCx43)和磷酸化Cx43(phosphorylatedconnexin43，pCx43)表達水平。
　　結(jié)果：(1)平衡灌注末各組間心功能指標無統(tǒng)計學差異。再灌注后，與I/R組比較，NP組明顯改善再灌注損傷心功能的各項指標(P＜0.05)，減少心肌梗死面積（24.4±4.8)％ vs（49.4±4.2)％（P＜0.05）;tCx43表達在線粒體中明顯升高，胞漿

6、中明顯降低，pCx43表達線粒體中明顯升高，胞漿中明顯降低。AGA逆轉(zhuǎn)了硫化氫后處理產(chǎn)生的心肌保護效應(yīng)及tCx43和pCx43在線粒體中表達的增加(P＜0.05)。(2)平衡灌注末各組間心功能指標無統(tǒng)計學意義。再灌注后，與I/R組比較，NP組心功能的各項指標明顯改善（P＜0.05）;心肌梗死面積減少（26.5±4.2）％vs（44.5±5.3）％(P＜0.05);凋亡指數(shù)降低（25.9±3.0）％vs(43.1±1.9)％（P＜0.05

7、）;線粒體tCx43和pCx43蛋白表達水平明顯升高。LY294002逆轉(zhuǎn)了H2S后處理產(chǎn)生的心肌保護效應(yīng)，使N+L組心功能指標及線粒體中tCx43和pCx43的表達水平降低（P＜0.05），心肌梗死面積及凋亡指數(shù)均增加(P＜0.05)。
　　結(jié)論：(1)縫隙連接蛋白Cx43參與了H2S后處理減輕離體大鼠心臟I/R損傷過程。(2) PI3K/Akt信號通路通過上調(diào)線粒體Cx43蛋白的表達而在H2S后處理中減輕離體大鼠心臟缺血/再灌