乳酸菌對小鼠派伊爾結黏附作用機制研究.pdf

1、派伊爾結(Peyer'spatch，PP)是腸道黏膜免疫系統(tǒng)的重要部位，是乳酸菌進入腸黏膜免疫誘導部位的主要通道。本課題研究乳酸菌黏附PP的性質及影響因子，有助于闡明乳酸菌調節(jié)黏膜免疫的機制，也將為乳酸菌免疫調節(jié)制劑的開發(fā)提供理論依據(jù)。 試驗先用小鼠PP組織切片為黏附基質，研究了10株乳酸菌的粘附性，結果顯示，嗜酸乳桿菌(L.acidophilus，LA)黏附PP的能力最強。利用細菌黏附正十六烷法測定了乳酸菌表面疏水性，結果表明

2、，10株乳酸菌的表面疏水性與粘附性呈負相關趨勢。酵母凝集和紅細胞凝集試驗分析了乳酸菌細胞表面凝集素的表達情況，結果表明，乳酸菌的凝集性與粘附性呈正相關趨勢，LA的凝集活性最強。 利用紅細胞凝集試驗和凝集抑制(HIA)試驗分析了LA凝集素的性質，結果表明，LA和Escherichiacoli(對照)均能引起豬和兔紅細胞凝集，說明其細胞表面可能存在凝集素樣物質。LA和E.coli經(jīng)高碘酸鉀，SDS，LiCl，胃蛋白酶、胰蛋白酶處理后

3、，其凝集性顯著降低，表明LA的凝集素樣物質為糖蛋白類。用11種糖進行HIA試驗，結果顯示，LA和E.coli的凝集反應主要被甘露糖、半乳糖抑制。兔紅細胞經(jīng)半乳糖苷酶修飾后，E.coli對其的凝集活性完全喪失，而LA的凝集活性不受影響，表明甘露糖、半乳糖是兩種菌表面凝集素的特異性糖，半乳糖不是LA表面凝集素的主要特異性糖。 為了進一步定量的分析介導LA黏附PP的物質，建立了一種準確、簡單、高效的微生物粘附性熒光定量檢測方法，用FI

4、TC標記的乳酸菌與PP組織塊在96孔組織培養(yǎng)板進行黏附試驗，洗去未結合細菌，消化組織，通過熒光值評價細菌黏附量，最佳檢測條件為：黏附時間1h，黏附溫度37℃，黏附后洗板次數(shù)3次，黏附細菌濃度1×109CFU/mL；消化時間為18h，消化溫度為70℃，消化液濃度1％(TritonX-100+KOH)。黏附試驗結果顯示，甘露糖、α-甲基-D-甘露糖苷可顯著抑制LA黏附PP，結合紅細胞凝集試驗結果，可知介導LA凝集PP的物質為甘露糖特異性凝集