乳酸菌對(duì)氟喹諾酮類藥物耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、本研究以源于內(nèi)蒙古地區(qū)的羊乳及其制品、嬰兒及乳牛糞便中分離的10株乳酸菌為研究對(duì)象，以標(biāo)準(zhǔn)敏感菌為對(duì)照，首先用試管兩倍稀釋法測(cè)定試驗(yàn)菌株對(duì)四種氟喹諾酮類藥物(氧氟沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星)的最小抑菌濃度(MIC)，并以MIC值為參考值用杯碟法通過抑菌直徑的判斷篩選出耐藥菌株。 對(duì)耐藥菌株通過乳酸菌的16SrRNA引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增并對(duì)PCR產(chǎn)物測(cè)序以進(jìn)行鑒定。然后通過熒光分光光度法結(jié)合外排蛋白抑制劑對(duì)試驗(yàn)菌株的一種耐藥

2、機(jī)制-主動(dòng)外排系統(tǒng)做一證實(shí)。另一種可能存在的耐藥機(jī)制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ(DNA旋轉(zhuǎn)酶)中g(shù)yrA基因和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ中parC基因的氟喹諾酮類藥物耐藥決定區(qū)(QRDR)的點(diǎn)突變，分別用相應(yīng)的引物對(duì)12株耐氟喹諾酮類藥的乳酸菌的QRDR區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并選擇其中2株菌進(jìn)行QRDR基因序列測(cè)定來確定。 試驗(yàn)菌株對(duì)氟喹諾酮類藥物均耐藥，并且其耐藥機(jī)制一部分是由于乳酸菌主動(dòng)外排系統(tǒng)的作用引起的，但是外排系統(tǒng)只是乳酸菌耐藥的一個(gè)原因，試驗(yàn)菌株還