A型肉毒素重鏈對大鼠脊髓損傷后總體蛋白表達、髓鞘相關糖蛋白及其受體表達的影響.pdf

1、目的:
　　1.在大鼠腰段脊髓損傷模型基礎上局部給予小劑量A型肉毒桿菌神經毒素重鏈(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,BoNT/AHC)，觀察其對脊髓損傷后局部總體蛋白表達譜的影響；
　　2.觀察BoNT/AHC對脊髓損傷局部髓磷脂相關糖蛋白及其受體表達的影響，為探討B(tài)oNT/A重鏈促進神經突起再生的機制提供實驗依據。
　　方法:
　　1.采用1ml注射器針頭

2、改制的脊髓損傷器械復制大鼠腰段脊髓半離斷性損傷模型；在模型復制同時由針頭所連接微量注射器向髓腔內注射不同劑量BoNT/A重鏈(2μg、4μg、6μg和8μg)；
　　2.于大鼠脊髓損傷后2天和20天提取損傷局部及損傷近端2~3cm組織蛋白進行SDS-PAGE+考馬氏亮藍染色確定蛋白表達有無差異，同時采用BoNT/A重鏈6?g劑量組進行雙向電泳+硝酸銀染色進一步確定蛋白表達差異的點數或點群分布；
　　3.根據雙向電泳所出現的點

3、群變化的分子量水平，采用western blot主要檢測BoNT/A重鏈對脊髓組織髓磷脂相關抑制因子—髓鞘相關糖蛋白（myelin associated glycoprotein,MAG）及其受體(nogo-receptor,NgR)的表達的干預作用。
　　結果:
　　1.單側腰段脊髓損傷模型顯微鏡下呈現明顯的一側脊髓結構破壞，局部神經細胞壞死、白質神經傳導束崩解不可辨認；
　　2.SDS-PAGE+考馬斯亮藍染色顯示

4、，單純脊髓損傷后，損傷局部蛋白表達與正常相比有明顯不同，有些分子量水平的蛋白表達明顯增多；BoNT/A重鏈用藥后2天及20天時，局部蛋白的表達與單純損傷組相比明顯不同，但與正常對照組類同、趨向正?；?br>　　3.雙向電泳+硝酸銀染色的結果進一步確定了這些蛋白表達變異的現象出現在多個分子量水平，呈現點或點群的表達變異。有10余種蛋白表達與單純損傷組明顯不同,呈向正常轉化的趨勢；主要的特點是：單純損傷時，某些蛋白點或點群表達增加，而Bo

5、NT/A重鏈干預后，這些變異又趨向于與正常對照組相似；
　　4.根據蛋白表達變異的分子量特點，選取MAG和NgR作為目標蛋白的wesetrb-blot結果顯示：單純脊髓損傷后MAG及NgR表達皆呈現增多，而髓腔內注射BoNT/A重鏈后這兩種蛋白的表達均減少，差異具有統計學意義（P<0.05）。
　　結論:
　　1.BoNT/A重鏈可干預大鼠脊髓損傷后局部蛋白表達譜變化；
　　2.BoNT/A重鏈可逆轉脊髓損傷后局