大鼠脊髓損傷后神經(jīng)元線粒體自噬及其相關(guān)蛋白BNIP3、NIX的表達(dá).pdf

1、目的：
　　研究大鼠脊髓損傷后脊髓組織神經(jīng)元自噬與線粒體自噬的表達(dá)變化以及線粒體自噬相關(guān)蛋白BNIP3、NIX和p53在大鼠脊髓損傷后不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)變化及意義,探討新的脊髓損傷繼發(fā)性神經(jīng)元死亡發(fā)生機(jī)制。
　　方法：
　　健康雄性SD大鼠,體重200-220g,取16只隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=8)和脊髓損傷后24h組(n=8),用于透射電鏡和免疫熒光檢測(cè)。另取48只隨機(jī)分為假手術(shù)組,損傷后6h、24h、48h、72h、9

2、6h組(n=8),用于熒光定量PCR(real-time PCR)和Western blot檢測(cè)。Allen’s法建立脊髓損傷模型,假手術(shù)組僅作T10椎板切除。各組在術(shù)前及術(shù)后6h、24h、48h、72h、96h采用BBB評(píng)分法評(píng)價(jià)大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能變化情況;透射電鏡觀測(cè)損傷組織的超微結(jié)構(gòu);熒光定量PCR檢測(cè)BNIP3mRNA的表達(dá)變化;Western blot檢測(cè)LC3、BNIP3、NIX、p53的表達(dá)變化;免疫熒光檢測(cè)LC3Ⅱ、BNI

3、P3的表達(dá)及定位。
　　結(jié)果：
　　1、假手術(shù)組中神經(jīng)元細(xì)胞核膜完整,胞質(zhì)中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及線粒體等細(xì)胞器形態(tài)正常,未見自噬體及線粒體自噬體;脊髓損傷后24h觀測(cè)到神經(jīng)元線粒體腫脹、空泡的形成,高倍鏡下檢測(cè)到神經(jīng)元自噬體及線粒體自噬體。
　　2、熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)BNIP3mRNA的表達(dá)量在損傷后6h明顯升高,并在24h達(dá)到高峰(p<0.01)。
　　3、Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)LC3-II/LC3I的

4、水平24h后明顯升高,96h仍有較高表達(dá)(p<0.01);BNIP3、p53的表達(dá)量在6h明顯升高,并在24h達(dá)到高峰(p<0.01),96h下降至損傷前水平;NIX的表達(dá)量在6h后明顯升高(p<0.01),96h仍有較高表達(dá)(p<0.01)。
　　4、免疫熒光顯示LC3II、BNIP3在脊髓損傷后24h神經(jīng)元中高表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　1.大鼠脊髓損傷后神經(jīng)元自噬以及線粒體自噬被誘導(dǎo)激活。
　　2.線粒體自噬相