豬血中過(guò)氧化氫酶的提取純化及性質(zhì)研究.pdf

1、過(guò)氧化氫酶又稱(chēng)觸酶，是一類(lèi)廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物體內(nèi)的末端氧化酶，酶分子結(jié)構(gòu)中含有鐵卟啉環(huán)，1個(gè)分子酶蛋白中含有4個(gè)鐵原子，專(zhuān)一分解過(guò)氧化氫，溶于水，幾乎不溶于乙醇、氯仿、乙醚。過(guò)氧化氫酶是在生物演化過(guò)程中建立起來(lái)的生物防御系統(tǒng)的關(guān)鍵酶之一，其生物學(xué)功能是催化細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫分解，防止脫脂過(guò)氧化。過(guò)氧化氫酶的研究可追溯到19世紀(jì)初，迄今它已經(jīng)成為農(nóng)業(yè)，以及與之相關(guān)的食品與乳制品業(yè)、紙漿和造紙業(yè)、以及農(nóng)業(yè)環(huán)保產(chǎn)業(yè)中有應(yīng)用價(jià)值的酶之一。

2、 首先，本研究以豬血為原料，采用sephadex G-100層析和PEG-6000分子篩層析法純化了過(guò)氧化氫酶。提取純化的結(jié)果是100 mL 豬血紅細(xì)胞經(jīng)提取純化冷凍干燥后可提取得0.64 g過(guò)氧化氫酶。豬血紅細(xì)胞中總酶活性為109037mmol/min/mL，粗酶液酶活性為29796 mmol/min/mL，純化后酶活性為87448mmol/min/mL，活力回收率約為80.2％。 然后，通過(guò)單因素和多因素實(shí)驗(yàn)確定

3、了過(guò)氧化氫酶活性測(cè)定的最佳提取方法。本實(shí)驗(yàn)采用全波長(zhǎng)掃描分析儀，對(duì)過(guò)氧化氫與鉬酸銨所形成的淡黃色絡(luò)合物(鉬黃)進(jìn)行了吸收峰的掃描，測(cè)定條件是測(cè)定波長(zhǎng)為405 nm，pH=7.4，反應(yīng)時(shí)間為3 min。 最后，對(duì)過(guò)氧化氫酶的性質(zhì)進(jìn)行了研究。測(cè)定了溫度、pH值、NaN<,3>和KCN，以及不同金屬離子對(duì)過(guò)氧化氫酶活性的影響。采用SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)測(cè)定純化后的豬血過(guò)氧化氫酶的亞基分子量。過(guò)氧化氫酶經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳后，進(jìn)行糖蛋白