1、研究背景及目的：
糖尿病腎病是導致終末期腎病的最主要病因，超40％的腎臟替代治療患者是由糖尿病引起。臨床主要表現(xiàn)為大量蛋白尿。研究認為蛋白尿的產(chǎn)生與腎小球足細胞損傷密切相關(guān)。在糖尿病腎病中，有多種因素如高血糖、血管緊張素Ⅱ(Ang-Ⅱ)等導致足細胞凋亡。嚴格控制血糖及應(yīng)用腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)阻斷劑能夠明顯減少尿蛋白的產(chǎn)生。
SIRT1是一種沉默信息調(diào)節(jié)因子，具有NAD+依賴的去乙?；富钚?，參與了多種疾病的
2、發(fā)病過程，其中也包括糖尿病腎病。在糖尿病腎病中，SIRT1參與了炎癥、細胞凋亡、纖維化等多個病理過程。在細胞凋亡方面，既往研究發(fā)現(xiàn)，高糖和Ang-Ⅱ可以通過不同的信號通路影響SIRT1的表達及活性，Ang-Ⅱ誘導內(nèi)皮細胞凋亡并激活了P38/SIRT1通路。高糖培養(yǎng)可以激活足細胞中的AMPK/SIRT1通路介導細胞凋亡。在臨床應(yīng)用中，奧美沙坦能夠減少糖尿病腎病患者尿蛋白，但是在血糖控制不佳的患者中，奧美沙坦降低尿蛋白的作用并不明顯。說明高
3、糖狀態(tài)下奧美沙坦的治療會受到影響。也提示高糖和Ang-Ⅱ可能通過不同通路誘導了足細胞凋亡。因此我們設(shè)想，在糖尿病腎病中，Ang-Ⅱ和高糖可能通過不同的信號通路（P38/SIRT1通路與AMPK/SIRT1通路）影響SIRT1的表達，從而導致了足細胞的凋亡，而奧美沙坦只能對P38/SIRT1通路起作用。
奧美沙坦是臨床常用的血管緊張素Ⅱ抑制劑，能夠抑制Ang-Ⅱ與血管緊張素Ⅱ受體的結(jié)合。既往認為Ang-Ⅱ主要通過絲裂原活化蛋白激
4、酶(MAPK)，尤其是ERK1/2信號通路誘導足細胞凋亡。而Ang-Ⅱ是否也能通過P38/SIRT1通路介導足細胞凋亡目前缺乏相關(guān)報道。
研究方法：
1.動物實驗:糖尿病腎病模型db/db小鼠為糖尿病組，并分成兩組:安慰劑組（db/db+ CMC）和奧美沙坦組(db/db+OM)，C57BL小鼠作用為非糖尿病組(WT)，每組10只。在小鼠10-12周齡時，開始藥物灌胃處理，安慰劑為0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC)，奧
5、美沙坦劑量為每天20mg/kg。在處理的第0、2、4、6、8、10、12周測尾靜脈血糖并收集24小時尿液測尿蛋白。第12周處死動物，留取腎組織做病理切片及提取組織蛋白，通過western blot分析蛋白通路變化。
2.細胞實驗:在33℃條件下，條件永生化小鼠足細胞可以進行傳代培養(yǎng)，并且需要在培養(yǎng)基(RPMI1640)中添加10％牛血清和1×104U/L的γ干擾素;在37℃條件下細胞開始分化，分化完成需要14天，分化時培養(yǎng)基中
6、不加γ干擾素。分化完成后給予葡萄糖、Ang-Ⅱ、奧美沙坦等刺激處理，收集細胞用流式細胞儀檢測凋亡或提取蛋白用WesternBlot方法分析通路變化。
3.統(tǒng)計學處理:所有數(shù)據(jù)結(jié)果用均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，利用Graphpad Prism5.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析和制圖。組間的差異分析方法采用one wayANOVA，定義P值＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
研究結(jié)果：
1.奧美沙坦治療12周后可以減少
7、db/db小鼠的尿蛋白，而不影響小鼠的體重和血糖。在db/db小鼠腎臟組織中，奧美沙坦明顯抑制p38/SIRT1通路，減少了足細胞的凋亡，但對AMPK沒有影響。
2.奧美沙坦能部分抑制高糖激活的AMPK/SIRT1通路，減少足細胞凋亡。
3.Ang-Ⅱ激活p38/SIRT1通路誘導足細胞凋亡，而奧美沙坦明顯的抑制這條通路，保護足細胞;P38抑制劑s8307具有類似作用。
結(jié)論:
本課題驗證了SIR