淫羊藿次苷Ⅱ通過p38MAPK信號通路調(diào)控成骨細(xì)胞護(hù)骨素表達(dá)和成骨分化研究.pdf

1、目的：
　　研究壯骨中藥淫羊藿有效成分淫羊藿次苷II（Icariside II,ICA II）對大鼠成骨細(xì)胞（Osteoblasts，OBs）骨保護(hù)素（Osteoprotegerin，OPG）表達(dá)的作用，以及該作用與 p38絲裂原活化的蛋白激酶（P38 mitogen activated protein kinase,P38 MAPK）信號通路的相關(guān)性，為骨質(zhì)疏松的治療提供藥理學(xué)基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　原代培

2、養(yǎng)新生大鼠成骨細(xì)胞OBs，進(jìn)行隨機(jī)分組：對照（C）組、ICA II組、混合組（ICA II+p38MAPK特異性抑制劑SB203580）、抑制劑組（SB203580）組。48h后分別收集細(xì)胞及上清液。采用pNPP法檢測各組OBs堿性磷酸酶（ALP）活性；Western blot法檢測 p38MAPK蛋白、磷酸化 p38MAPK(Phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)、OPG蛋白水平，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-

3、PCR法)檢測OBs OPG mRNA的表達(dá)水平。用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析各組數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.各組大鼠OBs ALP活性的比較
　　與C組相比，ICA II組OBs在加藥培養(yǎng)48h后，ALP活性明顯增多（P<0.05）；M組細(xì)胞ALP活性較ICA II組下降（P<0.05）；S組ALP活性較C組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.各組大鼠OBs p38磷酸化程度的比較
　　ICA II組p-p38M

4、APK水平較C組顯著升高（P<0.01）。與ICA II組相比，M組p-p38MAPK水平明顯降低（P<0.05），S組的p-p38MAPK與C組相較明顯降低（P<0.05）。各組間總p38MAPK表達(dá)量無明顯區(qū)別。
　　3.各組大鼠OBs OPG分泌水平的比較
　　與C組相較，ICA II組的OPG蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)（P<0.01）。M組在抑制劑SB203580的干預(yù)下OPG蛋白表達(dá)明顯受抑制（P<0.01）。S組與M組

5、、C組（P<0.05）之間均有明顯差異。
　　4.各組大鼠OBs OPG mRNA水平的比較
　　與C組比較，藥物作用48h后，ICA II組OBs OPG mRNA表達(dá)量顯著增加（P<0.01）；SB203580預(yù)先干預(yù)的M組細(xì)胞內(nèi)OPG mRNA表達(dá)量較ICA II組顯著減低（P<0.01）；S組OPG mRNA較C組減少（P<0.05）。
　　5.相關(guān)性分析
　　根據(jù)Pearson相關(guān)性分析，細(xì)胞內(nèi)磷酸化p

6、38MAPK表達(dá)量與ALP活性水平（r=0.668，P<0.05）、與OPG mRNA表達(dá)水平（r=0.695.P<0.05）以及OPG蛋白的分泌量（r=0.795.P<0.01）呈正相關(guān)。
　　結(jié)論：ICA II刺激后大鼠OBs的ALP活性增多，OPG mRNA表達(dá)上調(diào)，OPG蛋白分泌增多；ICA II干預(yù)下的p38MAPK磷酸化程度增加；抑制劑SB203580可通過抑制p38MAPK降低OPG表達(dá)。ICA II可刺激成骨細(xì)胞O