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1、以該課題組測定出的黑曲霉N25植酸酶phyA基因為目的基因(GenBank Accession No.AF218813),從信號肽序列切割位點序列之后設(shè)計上游引物(設(shè)計一個XbaⅠ酶切位點);在終止密碼子處設(shè)計下游引物(設(shè)計一個KpnⅠ酶切位點).用高保真度的聚合酶進行擴增,得到了大小約1.4kb的單一條帶產(chǎn)物,即為phyA表達片段.將該產(chǎn)物經(jīng)XbaⅠ和KpnⅠ酶切處理后連接到含有胚乳特異性啟動子(EGH5 promoter)的中間載體
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