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1、廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文米曲霉單寧酶基因的克隆及其在黑曲霉ST31中的表達(dá)姓名:黃小鳳申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):微生物學(xué)指導(dǎo)教師:黃日波20050601廣西大學(xué)碩士論文米曲霉單寧酶基因的克隆及其在黑曲霉ST3l中的表達(dá)CLONDiGOFTHETANNASEGENEFROMAspergillusoryzaeANDITSEXPRESSIONINAspergillusnigerABSTRACTTannnacyIhydroase(tannase)is
2、anenzymethathydroIyzestheesterbondsoftannicacidtoproducegaIioaoidandsomeothercompoundsTannaseiswideIYusedinbeveragefoodIeather,chemicaIandpharmicindustryItwasreportedtannaseisobtainednormaIIYbythefermentationofnaturaIAsp
3、ergiIlusstrainsThereisaIittIereporttoimproveitsproductionbygenerecombinationtechnoIogyAspergiIlusexpressionsystemhaveparticuIarexceIIenceincontrasttoEcoIiandyeastsuchashighsecretecapacity,highintensitypromoter,perfectpos
4、ttransIatonprocessandmaturefermenttechnicsNowadaysitisextensiveIYappIYingtoexpressionheteroIogousproteinbyusingAspergi/lusnigerexpressionsysteminfremdnessbutthosereportswasabsentinnationThegenewascIonedfr伽AspergiIlusoryz
5、aeatfrstandthenwasinsertedintheshuttIePIasmidANEP2一SP2TherecombinantPIasmidANEP2SP2tanwastransformedintoAspergiIlushigherstrainST31byprotopIasttransformationteohnoIogyTheserecombinantstrainswereinducedtoexpresswith1%帕Iro
6、seUItravioIetSpectroscopydetectedthetannaseactivityWegetastrainwhosehavethehighesttannaseactivityupt010402U/mIandaverageIeveIis8453U/mIItis23timesasoriginaIstrainTheoptmumtendtionsforpreparationofprotopIastsfromAspergiIl
7、usngierST31werenvestigatedtooTheresutwasobtainedafterAspergiI/usnigerST31wasCUIturedinC瓣containing1%CMCMaximumprotopIastYieIdOOUIdbeobtained20%byusing2,6ceIIuIsseand2%snaiIasestabiIizingwithNaCIandsucroseanddgestingfor25
8、hat30℃FurthermoretheconfguratonofprotopIastbymicroscopewasobservedAtIast20—30transformant/ugPIasmidDNAoftransformantelficiencywasattainedbyPEG/CaCI2methodsItcanconcIudedthehighefficiencytransformationsystemofAspergi//usn
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