柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元的制備及其在小鼠體內(nèi)的代謝研究.pdf

1、現(xiàn)有研究表明柿單寧具有清除自由基、抗氧化、抑制腫瘤、降血脂等多種生理活性，但其構(gòu)效關系尚不明確。由于柿單寧結(jié)構(gòu)較為復雜，因此研究其特征結(jié)構(gòu)單元對于其活性的貢獻有助于闡明其構(gòu)效關系。目前對于柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元制備主要采用凝膠色譜柱法和高效液相色譜法，存在制備量小，效率低等問題。本文研究了中壓制備液相色譜純化柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元的工藝條件，并對其在的小鼠體內(nèi)的代謝動力學以及代謝產(chǎn)物進行了分析，旨在為闡明柿單寧的生物活性和構(gòu)效關系提供參考。

2、r>　　1.采用中壓液相色譜制備柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元
　　以柿單寧為原料，甲醇和水作為流動相，采用中壓液相色譜快速制備系統(tǒng)和Flash column C18色譜柱(20-35μm，60(A))初步分離純化兩種柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元，然后利用半制備高效液相色譜進一步提高兩種二聚體的純度并制備收集，最后通過高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)對其進行結(jié)構(gòu)解析和確認，得到了純度分別為97.2％和95.4％的A型EGCG二聚體和A型ECG二聚體

3、。
　　2.柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元的體內(nèi)藥代學實驗
　　利用5％的吐溫80對超濾膜進行預處理，降低超濾膜與藥物之間的非特異性吸附，最終測定A型EGCG二聚體的血漿蛋白結(jié)合率為88.02％-92.49％，A型ECG二聚體的血漿蛋白結(jié)合率為93.35％-96.46％。柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元表現(xiàn)出一定的濃度依賴效應，隨著藥物濃度增加，血漿蛋白結(jié)合率也有一定程度的增大，并且A型ECG二聚體的血漿蛋白結(jié)合率稍大于A型EGCG二聚體?？紤]到兩種

4、二聚體血漿蛋白結(jié)合率較高，我們首先利用EGCG單體建立了一套簡單、快捷、準確的血漿樣品前處理藥代學方法，并驗證了該方法對兩種A型二聚體的適用性。通過Pksolver軟件分析了小鼠靜脈注射劑量為50mg/kg的A型兩種二聚體時的藥代學參數(shù)，小鼠靜脈注射A型EGCG和ECG二聚體的半衰期t1/2分別為120.54min和37.41min，血漿濃度最高時間Tmax均為5min，血漿中二聚體的最大濃度Cmax為32.56μg/mL和55.05μ

5、g/mL，藥時曲線下面積AUC(0-t)分別為1949.42μg/mL*min和2112.48μg/mL*min，平均滯留時間MRT分別為170.11min和40.38min，兩種A型二聚體在小鼠體內(nèi)存留時間短，代謝消除速度較快，作用時間較短。
　　3.柿單寧特征結(jié)構(gòu)單元的血漿、尿液代謝產(chǎn)物分析
　　采用高分辨率質(zhì)譜對兩種二聚體在小鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物進行了分析。結(jié)果表明，A型EGCG和ECG二聚體均能在血漿和尿液樣本中檢測到。