日本血吸蟲(chóng)DNA疫苗在小鼠體內(nèi)的代謝及時(shí)空表達(dá)規(guī)律研究.pdf

1、血吸蟲(chóng)病是一種世界性的寄生蟲(chóng)傳染性疾病，被列為世界十大惡性傳染病之一，對(duì)人類及家畜的安全都具有極大的危害，是許多國(guó)家和地區(qū)政府都非常重視的公共安全問(wèn)題。常規(guī)的預(yù)防和治療手段難以遏制形勢(shì)日益嚴(yán)峻的血吸蟲(chóng)疫情，疫苗作為一種良好的防治兼顧的措施，其研發(fā)具有重大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)價(jià)值。
　　 DNA疫苗是近20年才出現(xiàn)的疫苗概念，被譽(yù)為“第三代疫苗”，與常規(guī)的第一、二代疫苗相比具有顯著的優(yōu)勢(shì)。至今已有近百種針對(duì)各種重大疾病的DNA疫苗處于實(shí)驗(yàn)

2、室或臨床研發(fā)階段，其中已有四種獸用DNA疫苗被批準(zhǔn)上市，但尚無(wú)DNA疫苗產(chǎn)品被批準(zhǔn)用于人，概其原因主要是DNA疫苗的安全性評(píng)價(jià)體系尚缺乏規(guī)范的標(biāo)準(zhǔn)。本研究以日本血吸蟲(chóng)DNA疫苗為對(duì)象，旨在研究DNA疫苗在動(dòng)物體內(nèi)的分布和代謝規(guī)律。通過(guò)將綠色熒光蛋白EGFP基因和日本血吸蟲(chóng)抗原Sj23基因共同插入真核表達(dá)質(zhì)粒pVIVO2中，構(gòu)建了共表達(dá)和融合表達(dá)的DNA疫苗，應(yīng)用PCR檢測(cè)技術(shù)、熒光激發(fā)顯色技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）技術(shù)，分別在DN

3、A水平，抗原水平和抗體水平上研究了DNA疫苗在動(dòng)物體內(nèi)的分布，表達(dá)及代謝規(guī)律，為血吸蟲(chóng)DNA疫苗的臨床研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。
　　 本研究初步取得了以下成果：
　　 (1)應(yīng)用重組PCR技術(shù)成功構(gòu)建了日本血吸蟲(chóng)23 Kda膜內(nèi)在蛋白抗原Sj23基因和綠色熒光蛋白EGFP基因共表達(dá)的DNA疫苗pVIVO2-Sj23/EGFP和融合表達(dá)DNA疫苗pVIVO2-Sj23.EGFP，并進(jìn)行了酶切和測(cè)序驗(yàn)證。
　　

4、(2)應(yīng)用陽(yáng)離子脂質(zhì)體介導(dǎo)DNA疫苗轉(zhuǎn)染人胚腎癌細(xì)胞系(HEK-293)進(jìn)行體外表達(dá)驗(yàn)證，結(jié)果表明構(gòu)建的DNA疫苗可以在真核細(xì)胞中正確表達(dá)。
　　 (3)采用高鹽變性蛋白初步純化和色譜柱串聯(lián)精細(xì)純化等方法純化DNA疫苗，制備了醫(yī)藥級(jí)別的DNA疫苗產(chǎn)品。
　　 (4)肌肉注射DNA疫苗免疫BALB/c小鼠，利用PCR技術(shù)檢測(cè)DNA疫苗在小鼠體內(nèi)的生物分布，熒光顯微鏡檢測(cè)抗原蛋白的表達(dá)分布，ELISA檢測(cè)DNA疫苗誘發(fā)抗體的