柿子單寧體內(nèi)外抗氧化活性及結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、本文以柿子為原料，選擇了適于分離純化柿子單寧的大孔樹(shù)脂；比較了不同聚合度柿子單寧的體內(nèi)外抗氧化活性；研究了柿子單寧（柿子單寧）對(duì)D-半乳糖(D-gal)誘導(dǎo)的氧化損傷的保護(hù)作用；探索了柿子單寧在體外體系中對(duì)低密度脂蛋白(LDL)氧化損傷的保護(hù)作用；對(duì)柿子單寧的結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了研究。研究結(jié)果如下：
　　 1.柿子單寧的大孔樹(shù)脂的選擇。
　　 為了選擇對(duì)柿子單寧純化性能較好的樹(shù)脂，對(duì)五種大孔樹(shù)脂進(jìn)行了吸附與解吸實(shí)驗(yàn)。通過(guò)靜態(tài)、

2、動(dòng)態(tài)吸附試驗(yàn)，比較了五種樹(shù)脂對(duì)柿子單寧的吸附量、吸附率、解吸率、使用次數(shù)等指標(biāo)。結(jié)果表明，B型樹(shù)脂對(duì)柿子單寧具有吸附量大、易解吸、重復(fù)使用次數(shù)多、脫糖效果好等特點(diǎn)，是分離柿子單寧較理想的吸附樹(shù)脂。
　　 2.不同聚合度柿子單寧級(jí)分及柿子單寧的體外抗氧化作用。
　　 主要采用還原能力、清除羥基自由基能力、清除DPPH·及ABTS+·自由基的能力，以及對(duì)小鼠體外脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制作用等方法對(duì)柿子單寧級(jí)分的抗氧化效果進(jìn)行了綜合評(píng)

3、價(jià)。結(jié)果顯示，三個(gè)級(jí)分及柿子單寧在體外的各體系中均有很好的抗氧化效果，對(duì)體外脂質(zhì)過(guò)氧化有很好的抑制作用，且其抗氧化效果隨著聚合度增加而增強(qiáng)。
　　 3.柿子單寧及級(jí)分Ⅲ對(duì)溴苯誘導(dǎo)的急性氧化損傷的保護(hù)作用。
　　 溴苯模型的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，柿子單寧及聚合度高達(dá)33.6的級(jí)分Ⅲ在體內(nèi)可以防止由溴苯引發(fā)的血清及肝勻漿超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活性的下降(P＜0.01)及丙二醛水平的上升(P＜

4、0.01)。兩者均有很好的抗氧化效果，其效果不遜于低聚體含量大于70％的葡萄籽原花青素。但總體而言，柿子單寧的抗氧化效果優(yōu)于級(jí)分Ⅲ。
　　 4.柿子單寧對(duì)D-gal誘導(dǎo)的衰老小鼠的認(rèn)知障礙及氧化損傷的保護(hù)作用。
　　 實(shí)驗(yàn)小鼠被分為六組，皮下注射D-gal或生理鹽水六周，劑量為150mg/kg；從第三周開(kāi)始同時(shí)灌胃不同劑量的柿子單寧。六周試驗(yàn)完成后，通過(guò)礦場(chǎng)試驗(yàn)及水迷宮來(lái)觀察小鼠的行為學(xué)，通過(guò)海馬組織及皮膚組織切片來(lái)研究

5、細(xì)胞形態(tài)，同時(shí)檢測(cè)抗氧化酶（如SOD，CAT）的活性，非酶抗氧化劑（T-AOC，GSH等）的水平及脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物(MDA)的生成量。結(jié)果顯示，柿子單寧能部分改善由D-半乳糖引起的意識(shí)損傷，防止海馬組織損傷，提高抗氧化能力，可能成為治療衰老相關(guān)疾病的一種新的手段。
　　 5.柿子單寧在體外對(duì)LDL氧化的保護(hù)作用。
　　 在LDL的氧化修飾體系中加入柿子單寧后，可以顯著延緩共軛二烯的形成、維持LDL的構(gòu)象穩(wěn)定、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化

6、產(chǎn)物的生成等。因此，柿子單寧在體外對(duì)LDL的氧化修飾具有很好的保護(hù)作用。
　　 6.柿子單寧的結(jié)構(gòu)分析。
　　 對(duì)柿子單寧的結(jié)構(gòu)研究表明，柿子單寧有著不同于其它水果單寧的獨(dú)特結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：①末端構(gòu)成：Catechin(C)，epigallocatechin-3-O-gallate(EGCG)及楊梅素(myricetin)，延伸端結(jié)構(gòu)為epicatechin(EC)，epigallocatechin(EGC)，EGCG，epi