豬鏈球菌病防控新技術(shù)探索.pdf

1、豬鏈球菌病主要由豬鏈球菌（Streptococcus suis，SS）引起，可致急性死亡、急性敗血癥、腦膜炎等。SS根據(jù)其莢膜多糖抗原的差異可分為35個(gè)血清型，其中豬鏈球菌2型(SS2)毒力最強(qiáng)、流行最廣，對(duì)各國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。常規(guī)的豬鏈球菌治療方法主要是利用抗生素及增強(qiáng)病豬的自身抵抗力，但會(huì)出現(xiàn)抗生素殘留及耐藥的問(wèn)題，而在該病預(yù)防方面暫時(shí)也沒(méi)有非常有效且安全的疫苗。本文主要研究針對(duì)豬鏈球菌2型的抗生素替代藥物及基因工程減毒

2、疫苗，探索豬鏈球菌病防治的新途徑。
　　 噬菌體(Bacteriophage)廣泛存在于自然環(huán)境中，是各種細(xì)菌的天敵。本研究通過(guò)從健康豬的鼻腔分泌物和糞便中分離針對(duì)于SS2的烈性噬菌體，在篩選過(guò)程中能發(fā)現(xiàn)一些抑制SS2生長(zhǎng)的疑似濾液樣品，但重復(fù)驗(yàn)證未見(jiàn)它們對(duì)SS2有裂解作用。在誘導(dǎo)溶原性噬菌體方面，采用PCR方法檢測(cè)編碼鏈球菌噬菌體的主要蛋白（整合酶、穿孔素和細(xì)胞裂解素）基因。在44株SS2菌株中，SMP（已公布的豬鏈球菌烈性噬

3、菌體）-穿孔素基因的檢出率為100％(44/44)，SMP-整合酶基因的檢出率為9.1％(4/44)，SMP-細(xì)胞裂解素基因的檢出比率為18.2％(8/44)。但是，穿孔素和裂解素基因并非擴(kuò)增自同一個(gè)菌株。將SMP-整合酶基因或SMP-溶菌素陽(yáng)性的10株SS2，用絲裂霉素進(jìn)行誘導(dǎo)，均無(wú)法誘導(dǎo)得到溶原性噬菌體。
　　 乳酸鏈球菌素(Nisin)是一種公認(rèn)的、安全的天然生物性食品防腐劑和抗菌劑，能有效地殺死或抑制引起食品腐敗的革蘭氏

4、陽(yáng)性菌。聚-ε-賴氨酸(Poly-ε-lysin，ε-PL)是從白色鏈霉菌(Streptomyces albulus)的發(fā)酵液中提取分離得到，具有強(qiáng)烈的抑菌能力，在酸性和微酸性環(huán)境中對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌、酵母菌、霉菌均有很好的抑菌效果。本研究通過(guò)體外抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Nisin對(duì)SS2的最小抑菌濃度(MIC)為50-100μg/mL，而ε-PL對(duì)SS2的MIC高達(dá)500-1000μg/ml。對(duì)于SS2感染的BALB/c小鼠模型的治療效

5、果，Nisin在4mg組治療效果最好，存活率60％，而ε-PL在8mg組也沒(méi)有治療效果，存活率僅10％。Nisin可作為潛在的治療藥物。
　　 豬鏈球菌溶血素(Suilysin，SLY)是較早確定的豬鏈球菌毒力因子之一，具有細(xì)胞毒性，在豬鏈球菌致病過(guò)程中發(fā)揮重要作用。本研究利用同源重組技術(shù)成功構(gòu)建了sly基因缺失的突變株SS2-△sly。缺失株的體外溶血活性消失，對(duì)小鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞毒性顯著低于親本菌株（降低60％以上，P