豬鏈球菌防治新技術(shù)研究.pdf

1、本研究對16起疑似豬鏈球菌感染病料進(jìn)行分菌鑒定后,確認(rèn)14起為豬鏈球菌感染,其中2型3起,7型5起,6起是1、2、7和9型之外的血清型,一起弓形蟲感染,一起未查明病因。對甘、青、寧三省的豬鏈球菌2型的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果表明,臨床健康豬群的豬鏈球菌2型抗體陽性率為0～16.7％；連續(xù)5年從甘肅武威健康豬只采取扁桃體分菌,豬鏈球菌的分離率為27.2％,其中2型5.5％,9型13.2％,7型11.4％,1型3.7％,66％是1、2、7和9型之外的

2、血清型。藥敏檢測表明多重耐藥性菌株占分離菌株的84％以上。
　　 通過基因篩選、不相合性檢測及不同基因序列組合分型,發(fā)現(xiàn)由dnaK-EFTu-potA—eno-uvrA—guaB的基因合并序列所構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)生樹在各節(jié)點處的自舉檢驗值均≥85％,該系統(tǒng)發(fā)育樹從根本上提高了鏈球菌分型結(jié)果的可靠性。據(jù)此,鏈球菌分為3群,第一群為mitis群鏈球菌、豬鏈球菌和熱鏈球菌,豬鏈球菌與mitis群鏈球菌的遺傳關(guān)系極為密切；第二群為pyogen

3、ic群鏈球菌；第三群為變異鏈球菌和牛鏈球菌。該系統(tǒng)發(fā)育樹從根本上提高了鏈球菌分型的準(zhǔn)確性。potA基因上一段堿基序列,能夠在種的水平上對各種鏈球菌分類。
　　 通過滅活豬鏈球菌2型強毒株基因組上的D-丙氨酸消旋酶基因,篩選到依賴外源D-丙氨酸才能復(fù)制的變異菌株24株。接著通過生長試驗篩選出5株生長良好的變異菌株。為了選擇制苗菌株,將5個變異菌株分別接種于10只22-24g SPF昆明小鼠。4周后,根據(jù)小鼠不同組織器官中變異菌株的

4、存留情況以及免疫效力,篩選出一株制苗候選菌株,命名為S.suis serotype211△alr2／24。為測定該菌株實用免疫劑量,分別以5×108,1×109,2×109,3×109,4×109,5×109CFU劑量接種3-4周齡豬鏈球菌2型抗體陰性小豬5只,同時用5只小豬作為空白對照。免疫4周后,用1.7×107劑量的豬鏈球菌強毒株通過耳靜脈攻毒。結(jié)果對照組小豬在1周內(nèi)全部死亡(5／5),5×108組和1×109組歌存活3頭,2×1

5、09組以及3×109組各存活3頭,4×109和5×109組全部存活。從而確定4×109CFU為試制疫苗的實用劑量。用該劑量試制疫苗2批,在單次超劑量免疫仔豬的安全性試驗和單劑量多次免疫仔豬的安全性試驗中,從免疫仔豬的肝、心、脾、肺、腦和扁桃體均未檢測到1△alr2／24菌株存在,說明該疫苗是安全可靠的。試制疫苗2批,按實用免疫劑量接種小豬各5只。4周后,用藥2.1×107劑量的豬鏈球菌強毒株通過耳靜脈攻毒,結(jié)果未免疫小豬全部死亡,免疫組