超微量、高通量蛋白質(zhì)結(jié)晶和篩選方法的研究.pdf

1、目前，X射線晶體衍射技術(shù)是現(xiàn)階段最主要也是最可靠的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)測定方法，而如何獲得具有足夠衍射分辨率的蛋白質(zhì)晶體仍然是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究的主要瓶頸問題。由于蛋白質(zhì)結(jié)晶過程十分復(fù)雜，結(jié)晶條件的高通量篩選是獲得蛋白質(zhì)晶體的主要手段?；谖⒘骺丶夹g(shù)的蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選技術(shù)具有高通量、低消耗和集成化的優(yōu)點(diǎn)，為蛋白質(zhì)結(jié)晶的大規(guī)模篩選提供了重要的研究工具。
　　第一章綜述了蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)研究的主要方法，并介紹了商品化的蛋白質(zhì)結(jié)晶機(jī)器人;系統(tǒng)地綜述了基于微流

2、控芯片的蛋白質(zhì)結(jié)晶技術(shù)的原理和實(shí)現(xiàn)方法。同時，對用于膜蛋白結(jié)晶的微流控技術(shù)也進(jìn)行了介紹。
　　第二章的工作中，我們發(fā)展了一種基于順序操作液滴陣列(SODA)技術(shù)的超微量、高通量、納升級蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選系統(tǒng)。在此基礎(chǔ)上，發(fā)展了等體積連續(xù)試樣加入和變體積連續(xù)試樣加入兩種新型液滴操作模式，并將其應(yīng)用于蛋白質(zhì)結(jié)晶和篩選方法的研究。采用該方法，我們成功篩選了5種水溶性蛋白的結(jié)晶條件，單次實(shí)驗(yàn)共生成288個液滴結(jié)晶反應(yīng)器，蛋白質(zhì)溶液的總消耗量僅