濃度梯度液滴陣列形成系統(tǒng)用于蛋白質(zhì)結(jié)晶條件篩選的研究.pdf

1、蛋白質(zhì)作為生命的載體，為生命科學(xué)研究提供了十分重要的信息，因此自進入后基因組時代之后對蛋白質(zhì)的研究與日俱增。蛋白質(zhì)結(jié)晶的獲取成為該研究的重點之一，而傳統(tǒng)結(jié)晶篩選方法工作量較大、試劑消耗較多、效率較低，限制了該研究的發(fā)展。微流控液滴技術(shù)以其樣品消耗少、反應(yīng)條件穩(wěn)定、混合快速等特點，為蛋白質(zhì)結(jié)晶條件篩選提供了強有力的技術(shù)平臺。本文旨在發(fā)展能夠形成濃度梯度液滴陣列的微流控系統(tǒng)，并將其應(yīng)用于蛋白質(zhì)結(jié)晶條件的篩選。
　　論文第一章中，主要概

2、述了蛋白質(zhì)結(jié)晶的研究進展及微流控液滴技術(shù)，其中詳細介紹了蛋白結(jié)晶的生長過程及影響因素，簡要介紹了蛋白質(zhì)結(jié)晶的常用技術(shù)方法、微流控液滴形成技術(shù)以及微流控技術(shù)在蛋白結(jié)晶中的應(yīng)用，并提出了本論文的工作目的和設(shè)計思想。
　　論文第二章中，在課題組以前工作基礎(chǔ)上，設(shè)計了濃度梯度形成通道結(jié)構(gòu)和基于T型微通道液滴形成原理的油相通道，研制了濃度梯度液滴陣列形成系統(tǒng)。該濃度梯度液滴陣列形成系統(tǒng)具有結(jié)構(gòu)簡單、通量高等特點，且通過調(diào)節(jié)兩相流速、粘度等條

3、件可靈活控制形成液滴的大小。實驗考察了水相體積流速為1.0μL/min時，油相體積流速對液滴大小的影響。當(dāng)油相體積流速為35μL/min時，各通道產(chǎn)生液滴單分散性良好，液滴平均長度約為170μm，96條通道中各同一通道內(nèi)液滴長度的RSD為0.0％-5.0％，96條通道間液滴長度的RSD為7.0％。
　　論文第三章中，將濃度梯度陣列液滴形成系統(tǒng)用于溶菌酶結(jié)晶條件的篩選。該系統(tǒng)可同時考察溶菌酶、沉淀劑、結(jié)晶體系pH值以及不同種類沉淀劑