丁香酚通過嗅覺通路對自閉癥鼠學(xué)習(xí)記憶及海馬區(qū)5羥色胺表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　本研究采用母鼠孕后12.5天單次腹腔注射丙戊酸鈉600mg/kg制備自閉癥動物模型，觀察丁香酚精油通過嗅覺通路干預(yù)對自閉癥模型鼠學(xué)習(xí)記憶功能的改善情況；免疫組織化學(xué)染色法檢測大鼠海馬區(qū)5羥色胺(5-hydroxy tryptamine，5-HT)表達(dá)水平變化，初步探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.丙戊酸鈉誘導(dǎo)制備自閉癥鼠模型清潔級 SD(Sprague-Dawley)大鼠于受孕后第12.5天給予單

2、次丙戊酸鈉600mg/kg腹腔注射制備自閉癥模型，對照組給予等量生理鹽水。自閉癥模型組孕鼠所產(chǎn)幼鼠記錄為丙戊酸鈉組(VPA組)；對照組孕鼠所產(chǎn)幼鼠為生理鹽水組(NS組)。將幼鼠出生后當(dāng)天記錄為生后第一天（PN1），分別記錄VPA組、NS組幼鼠發(fā)育學(xué)及行為學(xué)情況。
　　2.丁香酚精油通過嗅覺通路對自閉癥鼠學(xué)習(xí)記憶影響的實驗研究：選擇成功造模的P35 VPA組鼠20只，隨機(jī)分為模型吸嗅組（VPA-E，n=10）和模型對照組(VPA-C

3、,n=10)，其中NS組仔鼠作為正常對照組。VPA-E組幼鼠予以1/1000的濃度稀釋后丁香酚精油吸嗅，每天3次，每次30min，共持續(xù)4周，對照組以蒸餾水代替精油。利用Morris水迷宮測定各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，以定位航行實驗中大鼠找到平臺的時間（即逃避潛伏期）和空間探索實驗中大鼠穿越平臺的次數(shù)（即穿臺次數(shù)）為實驗的檢測指標(biāo)。記錄丁香酚精油嗅覺吸入干預(yù)后自閉癥鼠學(xué)習(xí)記憶有無改善；行為學(xué)結(jié)束后處死大鼠取腦組織制備石蠟切片，免疫組化染色法

4、觀察海馬區(qū)5-HT表達(dá)水平的變化情況。
　　結(jié)果:
　?。?）與NS組相比，VPA組幼鼠顯示出生長發(fā)育的遲緩，具體表現(xiàn)為P7、P14、P21、P56時體重減輕，PN13-15天睜眼情況評分較低，PN7-10天方向趨向性較差，PN8、PN12時游泳表現(xiàn)評分較低，P9-11嗅覺辨別能力發(fā)育延遲，以上差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；行為學(xué)方面可見VPA組幼鼠表現(xiàn)為社交行為次數(shù)減少及行為累積持續(xù)時間的縮短，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（

5、P<0.05）；探索行為減少及重復(fù)理毛持續(xù)時間明顯增多（P<0.05）；Morris水迷宮實驗中，VPA組幼鼠表現(xiàn)為逃避潛伏期明顯延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），穿越平臺次數(shù)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　（2）丁香酚精油干預(yù)4周后，VPA-C組的逃避潛伏期顯著長于NS組,穿越平臺次數(shù)少于NS組,差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;VPA-E組鼠逃避潛伏期短于VPA-C組、穿越平臺次數(shù)多于VPA-C組，差異

6、有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；VPA-E組與NS組相比，逃避潛伏期及穿越平臺數(shù)差異無顯著性。
　?。?）海馬區(qū)免疫組化染色結(jié)果，VPA組海馬區(qū)5-HT反應(yīng)陽性神經(jīng)元的數(shù)量較NS組減少，染色較淺，VPA-E組腦組織海馬區(qū)5-HT陽性神經(jīng)元的數(shù)量較VPA-C增多，染色加深。
　　結(jié)論:
　?。?）VAP組幼鼠表現(xiàn)為生長發(fā)育遲緩、社交次數(shù)減少及持續(xù)時間縮短、重復(fù)行為、探索活動減少和學(xué)習(xí)記憶障礙等，VPA自閉癥模型具有較好的表