鉛對(duì)仔鼠學(xué)習(xí)記憶及其海馬中SNAP-25基因表達(dá)的影響.pdf

1、鉛是一種具有神經(jīng)毒性的重金屬，在環(huán)境中可長(zhǎng)期積蓄造成污染，通過食物鏈、水、土壤和空氣進(jìn)入人體。近年來，隨著我國(guó)城市化、工業(yè)化的發(fā)展，環(huán)境污染日益加重，環(huán)境中鉛濃度不斷升高。由于胎兒及嬰幼兒的血腦屏障發(fā)育不完善，鉛很容易進(jìn)入腦組織，使發(fā)育中的神經(jīng)系統(tǒng)受到鉛的損害，在兒童主要表現(xiàn)為學(xué)習(xí)記憶能力降低及行為發(fā)育異常。突觸體相關(guān)蛋白(Synaptosomal-associated Protein，即SNAP-25)，在成年動(dòng)物的海馬中主要分布于苔

2、狀纖維末梢以及齒狀回的分子層。以往的研究表明，SNAP-25與樹突與軸突的生長(zhǎng)、神經(jīng)遞質(zhì)的釋放以及中樞神經(jīng)損傷后突觸的可塑性有關(guān)，并且當(dāng)海馬誘導(dǎo)長(zhǎng)時(shí)期增強(qiáng)(Long-term potentiation，即LTP)后，SNAP-25的表達(dá)量增多。SNAP-25在鉛對(duì)智力影響中所起的作用，目前尚無明確結(jié)論。
　　 目的
　　 本研究擬探討不同水平鉛暴露對(duì)仔鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及SNAP-25在鉛中毒機(jī)制中的作用。
　　

3、 方法：
　　 1.研究對(duì)象
　　 清潔級(jí)昆明小鼠受孕后隨機(jī)分為4組，每組10只，3個(gè)鉛暴露組孕鼠自懷孕第1d起至仔鼠斷乳期(出生后21d)，分別給予醋酸鉛含量為0.3g/L、1.0g/L和3.0g/L的飲水，對(duì)照組給予無鉛雙蒸水。仔鼠出生后由母鼠喂養(yǎng)至斷乳。
　　 2.研究方法
　　 2.1血鉛和組織鉛濃度的測(cè)定
　　 采用Z-5000石墨爐原子吸收光譜儀測(cè)仔鼠血鉛和組織鉛濃度。
　　

4、 2.2學(xué)習(xí)記憶能力的測(cè)定
　　 利用水迷宮來觀察仔鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。
　　 2.3目的基因mRNA表達(dá)水平的測(cè)定
　　 采用RT-PCR法擴(kuò)增SNAP-25mRNA片段。
　　 2.4目的蛋白質(zhì)表達(dá)的細(xì)胞學(xué)定位
　　 采用過氧化物標(biāo)記的鏈霉素卵白素免疫組化染色，檢測(cè)SNAP-25在海馬組織中的表達(dá)情況。
　　 2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處

5、理，采用單因素方差和Pearson相關(guān)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1鉛暴露對(duì)小鼠血液和海馬組織中鉛濃度的影響
　　 各年齡段鉛暴露仔鼠血鉛和腦鉛水平均明顯高于對(duì)照組(P<0.01)，鉛暴露各組之間差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各鉛暴露組仔鼠血鉛水平隨日齡變化而呈現(xiàn)規(guī)律性變化，即第7天較高，第14天有所下降，第21天則明顯增加。各鉛暴露組仔鼠海馬組織中鉛水平隨日齡變化也呈一定的規(guī)律，與血鉛的變

6、化規(guī)律有所不同，即第7天較高，第14天最高，第21天最低。
　　 2水迷宮試驗(yàn)
　　 21d仔鼠錯(cuò)誤次數(shù)有隨母鼠鉛暴露劑量增加而增加的趨勢(shì)；低劑量組與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；中、高劑量組與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；高劑量組平均逃避潛伏期與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3母體鉛暴露對(duì)21d仔鼠海馬組織中SNAP-25mRNA表達(dá)的影響
　　 SNAP-25 m

7、RNA在對(duì)照組海馬中的表達(dá)量較高，隨著母鼠鉛暴露劑量的增加，其表達(dá)有降低的趨勢(shì)，低、中和高劑量組與對(duì)照組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 421d仔鼠海馬組織免疫組織化學(xué)結(jié)果
　　 鉛暴露組仔鼠海馬的CA1和CA4區(qū)域SNAP-25蛋白的表達(dá)明顯低于對(duì)照組(P<0.05)，但是隨著劑量的增加，不同的鉛暴露組在海馬的不同區(qū)域SNAP-25蛋白的表達(dá)也有所不同。
　　 結(jié)論：
　　 1母體鉛暴露使鉛