蘇云金芽孢桿菌S-layer促進轉(zhuǎn)化功能的研究及高效工程菌株的構建.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、蘇云金芽孢桿菌7404、006、HDX和HD-2是該室分離保藏的4株有特異殺蟲活性的野生菌株.在以往的遺傳改良研究中,從未獲得含有外源cry基因的轉(zhuǎn)化子.該文首次建立用固體培養(yǎng)菌體代替原來的液體培養(yǎng)菌體誘導感受態(tài)的方法,使上述4株Bt菌獲得成功的轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化效率為10<'1>~`10<'2>轉(zhuǎn)化子.ug<'-1>DNA.利用電子顯微鏡研究上述4株Bt野生菌株固體及液體培養(yǎng)物細胞表面結構,證明Bt細胞在固體培養(yǎng)條件下呈現(xiàn)感受態(tài)的重要標志是形

2、成一種細胞表面層蛋白(S-layer).利用固體和液體培養(yǎng)物大量制備S-layer蛋白并進行SDS-PAGE分析,同樣肯定了在固體培養(yǎng)條件下這一特異蛋白的存在.由此證明Bt中S-layer可能是一種感受態(tài)因子,對轉(zhuǎn)化有重要的促進作用.論文中設計并且優(yōu)化了一種大量提取S-layer蛋白的方法并確定了4株菌S-layer蛋白分子量.該文利用改進的PCR-RFLP方法對高效的Bt 15A3菌株中疑似的cry1Aa類新基因進行了鑒定,實驗結果證

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