細(xì)菌有機(jī)磷降解酶基因在煙草中的表達(dá)及轉(zhuǎn)基因植物有機(jī)磷降解研究.pdf

1、有機(jī)磷化合物在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中作為農(nóng)藥廣泛使用,在使用的同時(shí)也造成火面積的污染.目前尚未有經(jīng)濟(jì)、有效的污染治理與修復(fù)手段. 本研究在煙草中表達(dá)細(xì)菌來(lái)源的有機(jī)磷降解酶基因ophc2.構(gòu)建了該基因的植物表達(dá)載體,獲得的ophc2最終表達(dá)框,包含CaMV 35S啟動(dòng)子序列、extensin序列、ophc2有機(jī)磷降解酶編碼基因和FIOS終北子序列,命名為pBl-E-ophc2.胡蘿卜extensin基因的信號(hào)肽序列引導(dǎo)ophc2基岡產(chǎn)物表達(dá)到胞外.

2、 經(jīng)過(guò)農(nóng)桿菌葉盤(pán)法轉(zhuǎn)化,共獲得10l株轉(zhuǎn)化植株,PCR檢測(cè)證實(shí)有80株含有目的基因片段.從80株中隨機(jī)挑選60株經(jīng)westei.n blot檢測(cè),有24株呈陽(yáng)性.ELISA分析結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因植株生艮培養(yǎng)基中有OPt-IC2蛋白存在.酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn)表明,轉(zhuǎn)基因植株可以釋放有機(jī)磷降解酶到培養(yǎng)基中,并且具有有機(jī)磷水解酶活性.甲基對(duì)硫磷的植物耐受性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因植株可以抵抗較高濃度(0.02﹪甲基對(duì)硫磷)的甲基對(duì)硫磷而正常生長(zhǎng),與