谷氨酸棒桿菌天冬氨酸激酶基因的克隆和應(yīng)用研究.pdf

1、運用傳統(tǒng)育種手段篩選到谷氨酸棒桿YS的多重代謝突變組合菌株YS-C.該菌株為蘇氨酸營養(yǎng)缺陷型,具有對賴氨酸的結(jié)構(gòu)類似物AEC和AHV的抗性,并且能以琥珀為唯一碳源生長,能夠耐受高濃度亮氨酸.突變株YS-C的賴氨酸產(chǎn)量為1.2g/l發(fā)酵液,是出發(fā)親株YS的賴氨酸產(chǎn)量0.35g/l的3.42倍.運用PCR的方法從谷氨酸棒桿菌AEC抗性菌株GX梁色體上擴增出天冬氨酸激酶基因,并構(gòu)建重組穿梭質(zhì)粒pELY.利用電轉(zhuǎn)化的方法將重組穿梭質(zhì)爛pELY轉(zhuǎn)

2、入多重代謝突變組合菌株YS-C,獲得重組谷氨酸棒桿菌菌株:CZL.該菌的賴氨酸生產(chǎn)能力為6.94g/l,是YS-C菌株賴氨酸產(chǎn)量的5.78倍,是YS菌株賴氨酸產(chǎn)量的19.8倍.通過搖瓶發(fā)酵實驗初步確定CZL的發(fā)酵條件為:初糖:150-180g/l,采用無機氮源和有機氮源配和使用,最佳組合是:硫酸銨質(zhì)量濃度為55g/l;酵線膏質(zhì)量濃度為15g/l,牛肉膏質(zhì)量濃度為25g/l為最佳.在500ml的三角瓶裝液量為30ml于往復(fù)式搖床上振蕩培養(yǎng)