谷氨酸棒狀桿菌乙酸代謝調(diào)控的研究.pdf

1、浙江大學博士學位論文谷氨酸棒狀桿菌乙酸代謝調(diào)控的研究姓名：阮紅申請學位級別：博士專業(yè)：生物化學工程指導教師：朱自強李德葆2001.1.1失菌株相反的效應。以上結(jié)果說明off42可能編碼了一個能被葡萄糖激活的阻遏蛋白分子或共阻遏分子，當該阻遏蛋白分子作用于pta—ack操縱了后，將抑制PTA和AK酶的轉(zhuǎn)錄和表達；off42顯示參與了PIA利AK的調(diào)控，而并刁i參與劉IcL刺Ms的調(diào)控。、構(gòu)建用于篩選乙酸代謝調(diào)控突變子的新型檢測系統(tǒng)。在原有

2、的檢測載體含有報告基因——氯霉素轉(zhuǎn)乙酰酶基因的基礎上發(fā)展了兩種新型檢測載體pROH7和pROHO，它們含有與乙酸代謝調(diào)控有關(guān)的啟動子區(qū)域，含有D一半乳糖苷酶基因LacY和四環(huán)素抗性基因。在野生型菌株中引入該兩種新的檢測載體并建立了兩套乙酸代謝途徑中調(diào)控狀況的檢測系統(tǒng)，它可直接通過藍白斑表型進行乙酸代謝調(diào)控轉(zhuǎn)座子突變予的檢測和篩選。在含葡萄糖的基質(zhì)上篩選藍斑為酶調(diào)控阻遏子的突變株；在含乙酸的基質(zhì)上篩選白斑為酶調(diào)控激活子的突變株。最后通過四

3、種乙酸調(diào)控的關(guān)鍵酶AK、PTA、ICL和Ms的酶活測定，進一步鑒定所檢測的轉(zhuǎn)座了插入突變株的調(diào)控功能。對碳代謝調(diào)控蛋白A基因(ccpA)突變子的初步鑒定。兩個與ccpA基因具有高度同源序列的ccpA68和ccpA82基因通過插入突變獲得了相應的基因突變株。對該兩個突變株的四種乙酸代謝關(guān)鍵酶PTA、AK、ICL和Ms的酶活分析表明，兩個突變株在葡萄糖或／和乙酸為基質(zhì)的培養(yǎng)基上表現(xiàn)出原始菌株的相似酶活特征。該結(jié)果初步表明碳代謝調(diào)控蛋白A(C