INI1-hSNF5-BAF47參與基因轉錄調控的分子機制的研究.pdf

1、真核生物的基因組是以染色質的形式存在的，染色質結構與基因的轉錄調控活動密切相關。基因轉錄前染色質結構要發(fā)生一系列的變化，以利于基因轉錄的起始和延伸。有兩類復合物參與了染色質結構的修飾和重塑，其中一類是組蛋白乙酰轉移酶(HATs)和組蛋白去乙?；?HDACs)復合物，這兩種酶通過對核心組蛋白進行可逆修飾來調節(jié)核心組蛋白的乙?；?，從而調控基因的激活或抑制；另一類是依賴ATP的染色質重塑復合物，在核小體內以ATP依賴的方式通過改變DNA

2、與組蛋白之間的連接來改變染色質的結構。 人的染色質重塑復合物(hSWI/SNF)能夠通過引起染色質結構的重塑調控基因轉錄活動，進而在細胞的增殖與分化、抗病毒活性及腫瘤抑制等方面起重要作用。INI1/hSNF5/BAF47是hSWI/SNF復合物的核心亞基，盡管已有很多報道證明它參與了許多基因的轉錄調控活動，但對其調控機制還不十分清楚。 本文旨在證實INI1/hSNF5/BAF47是否參與了CSF1和c-fos的基因轉

3、錄調控，并對其分子機制進行初步探討。在HeLa細胞中，通過瞬時轉染、熒光素酶雙報告系統(tǒng)檢測、RT-PCR及RealtimeRT-PCR等實驗方法，研究了INI1/hSNF5/BAF47參與CSF1基因轉錄的調控活動。研究結果表明，INI1/hSNF5/BAF47的過表達不僅能夠促進CSF1啟動子的活性，還能促進內源CSF1的基因轉錄。小分子干涉RNA質粒(siINI1)能明顯抑制CSF1基因的啟動子活性和內源CSF1的基因轉錄。并且，I

4、NI1/hSNF5/BAF47結構的完整性是激活CSF1啟動子所必需的。這些實驗結果說明，INI1/hSNF5/BAF47在CSF1基因的轉錄激活調控中有一定作用。對INI1/hSNF5/BAF47上調CSF1基因轉錄可能的機制進行的研究結果表明，INI1/hSNF5/BAF47對CSF1的轉錄調控作用需要染色質結構及Z-DNA結構的形成。染色質免疫共沉淀實驗結果顯示，INI1/hSNF5/BAF47對CSF1的轉錄調控依賴于在啟動子序

5、列的募集作用。 另一方面，在293T細胞中，通過一系列的共轉染實驗證實，INI1/hSNF5/BAF47的過表達抑制了c-fos啟動子的活性和內源c-fos的基因轉錄。小分子干涉RNA質粒(siINI1)可以逆轉INI1/hSNF5/BAF47對c-fos基因轉錄的抑制作用。而且，INI1/hSNF5/BAF47的兩個高度重復結構域(Rpt1andRpt2)與抑制c-fos基因轉錄的活性有關。這些實驗表明，INI1/hSNF5

6、/BAF47在c-fos基因的轉錄抑制調控中有一定作用。在探討INI1/hSNF5/BAF47抑制c-fos基因轉錄機制的研究中發(fā)現(xiàn)，由組蛋白去乙?；感揎椀慕M蛋白去乙?；荌NI1/hSNF5/BAF47介導的c-fos基因轉錄抑制作用所必需的。組蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)和INI1/hSNF5/BAF47能夠結合成復合物，二者的相互作用能夠共同抑制c-fos的基因轉錄。染色質免疫共沉淀實驗結果表明，INI1/hSNF5/BAF4

7、7能被募集到c-fos啟動子的區(qū)域上降低組蛋白的乙酰化。以上這些實驗結果說明，INI1/hSNF5/BAF47以組蛋白去乙?；敢蕾嚨姆绞揭种屏薱-fos的基因轉錄。 綜上所述，本文首次報道了INI1/hSNF5/BAF47不僅能夠促進CSF1的基因轉錄，而且還能以組蛋白去乙?；敢蕾嚨姆绞揭种芻-fos的基因轉錄。本文對INI1/hSNF5/BAF47作為一個雙重共調節(jié)因子參與基因轉錄調控的分子機制進行了初步研究，為進一步了