YB-1在骨肉瘤中的作用、表達(dá)調(diào)控機(jī)制及臨床意義.pdf

1、骨肉瘤是最常見的惡性骨腫瘤,好發(fā)于兒童和青少年,約占骨惡性腫瘤的1/5,是導(dǎo)致兒童和青少年死亡的最常見的疾病之一。目前關(guān)于骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展的具體機(jī)制仍不十分清楚。YB-1(Yboxbindingprotein1)是由YBX1基因編碼的一組具有高度保守核酸結(jié)合序列的冷休克蛋白家族成員之一。近來大量研究表明YB-1在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展、腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移方面有著非常重要的作用。本課題擬通過分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)以及基因芯片等相關(guān)技術(shù)手段,闡明

2、YB-1在骨肉瘤中的作用以及調(diào)控機(jī)制,以期為骨肉瘤的分子診斷、預(yù)后判斷以及治療提供新的參考指標(biāo)或靶點。
　　收集我科現(xiàn)有的隨訪資料完整的骨肉瘤患者的穿刺活檢病理蠟塊標(biāo)本,采用免疫組織化學(xué)的方法對YB-1的表達(dá)量進(jìn)行分級。我們發(fā)現(xiàn)YB-1表達(dá)高和表達(dá)低的患者組織學(xué)分級分別為Ⅲ級6例(11.5％)和17例(27%),Ⅳ級46例(88.5%)和47例(74.6%),YB-1表達(dá)量高的患者腫瘤惡性程度更高(p=0.03)。此外,兩組化療誘

3、導(dǎo)腫瘤壞死率分別為好(GR)22例(42.3%)和40例(63.5%)。生存分析發(fā)現(xiàn)YB-1表達(dá)高和YB-1表達(dá)低的患者5年整體生存率分別為61.2%和76.6%(p=0.054),5年無事件生存率分別為52.5%和72.4%(p=0.033)。YB-1表達(dá)高和表達(dá)低的轉(zhuǎn)移率分別為41.8%和22.7%(p=0.036)。此外,免疫組化發(fā)現(xiàn)在YB-1高表達(dá)的樣本中VEGF和CD31水平也明顯升高。以上結(jié)果表明YB-1表達(dá)量高的患者,其轉(zhuǎn)

4、移發(fā)生的可能性明顯升高,且預(yù)后更差。
　　在高轉(zhuǎn)移能力的骨肉瘤細(xì)胞系(LM-7)中YB-1的mRNA和蛋白表達(dá)量均顯著地高于其他細(xì)胞系。在低表達(dá)YB-1的SaOS2細(xì)胞系中過表達(dá)YB-1顯著提高其侵襲、遷移能力。相反,在LM-7細(xì)胞系中敲低YB-1則抑制了其侵襲和遷移能力。體內(nèi)研究發(fā)現(xiàn)高表達(dá)YB-1促進(jìn)了SaOS2的肺轉(zhuǎn)移能力,而敲低YB-1抑制LM-7細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移能力。但體內(nèi)及體外實驗發(fā)現(xiàn)YB-1均不能影響腫瘤細(xì)胞的增殖及生長。

5、耐藥性試驗結(jié)果顯示,YB-1通過抑制順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡作用而拮抗順鉑對骨肉瘤的治療作用。此外,通過基因表達(dá)譜芯片以及生物信息學(xué)分析,提示YB-1可能通過調(diào)控TAT,VEGFA,MVP等基因介導(dǎo)其促腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲以及耐藥的作用。
　　對骨肉瘤臨床樣本進(jìn)行miRNA芯片分析并利用miRNA靶基因的分析軟件對候選靶基因進(jìn)行預(yù)測,發(fā)現(xiàn)miR-382和miR-30d在YB-1的3’UTR區(qū)域均具有潛在的作用靶點。進(jìn)一步實驗證明miR-3

6、82通過與YB-1基因的3'UTR直接結(jié)合調(diào)控YB-1的表達(dá)。通過對臨床樣本的檢測發(fā)現(xiàn),miR-382和YB-1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性。轉(zhuǎn)染miR-382明顯的抑制了YB-1介導(dǎo)的細(xì)胞侵襲和遷移能力,并提高了細(xì)胞對順鉑化療的敏感性。
　　在YB-1表達(dá)高的患者中,恩度組和對照組化療誘導(dǎo)腫瘤壞死率好(GR)為22例(71%)和22例(42.3%),恩度組化療反應(yīng)好的患者比例明顯高于對照組(p<0.01)。而在YB-1表達(dá)量低的患者中,兩組