多重熒光定量PCR檢測艱難梭菌感染的方法探索.pdf

1、目的：近年來，隨著艱難梭菌流行菌株027等的出現(xiàn)，艱難梭菌的發(fā)病率及致死率越來越高，快速、準確檢測艱難梭菌對臨床決策非常重要。本研究旨在建立一種可以同時檢測艱難梭菌主要毒素基因tcdA、tcdB的多重定量PCR方法。
　　方法：收集2014.10-2015.03月期間臨床送檢的大便標本，進行分離培養(yǎng)，可疑菌落經基質輔助激光解吸飛行時間質譜技術及擴增16sRNA鑒定，獲得的菌株分別采用普通PCR及Taqman探針法多重定量PCR檢測

2、艱難梭菌毒素基因tcdA、tcdB及管家基因TPI。
　　結果：在收集到的107株符合要求的大便標本中，經鑒定共分離出20株艱難梭菌。普通PCR檢測結果為：tcdA-tcdB-的菌株為4株， tcdA+tcdB+的菌株為16株，未發(fā)現(xiàn)tcdA-tcdB+的菌株，陽性率為18.7％。應用本研究設計的引物及探針對標準菌株進行檢測發(fā)現(xiàn)tcdA擴增效率可達91%，最低檢測限為101，TPI擴增效率僅為79%，最低檢測限為102，未能成功檢