2709堿性蛋白酶水解肽譜的動態(tài)研究.pdf

1、蛋白酶是催化蛋白質(zhì)水解的一類酶，在食品、釀造和醫(yī)藥等工業(yè)領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用，蛋白酶對蛋白質(zhì)氨基酸序列的水解，在酶切位點(diǎn)的選擇上具有不同程度的特異性。微生物來源的蛋白酶，如2709堿性蛋白酶，是位點(diǎn)特異性比較弱的蛋白酶，其酶切肽譜的規(guī)律尚未有報(bào)道過，其肽譜的分析也不能采用目前廣泛應(yīng)用的位點(diǎn)特異性酶切肽譜鑒定方法。位點(diǎn)非特異性酶切肽譜鑒定方法，不依賴特異的酶切位點(diǎn)，因此更適合于位點(diǎn)特異性比較弱的多數(shù)工業(yè)蛋白酶制劑，但是該方法的可靠性和鑒定肽

2、譜的能力尚缺乏深入的評價(jià)。研究蛋白酶水解蛋白獲得的肽譜，對于深入了解蛋白酶的水解特性及促進(jìn)其在食品工業(yè)上的應(yīng)用具有重要的作用。本論文在位點(diǎn)非特異性酶切肽譜分析方法建立、2709堿性蛋白酶的純化及其水解大豆蛋白的肽譜變化規(guī)律方面做了研究，主要研究如下:
　　首先，本研究通過對牛血清白蛋白和大豆蛋白的胰蛋白酶水解物的分析，從單一種類蛋白和混合蛋白兩個(gè)層次上，比較了位點(diǎn)非特異性肽譜鑒定方法與位點(diǎn)特異性肽譜鑒定方法。相比位點(diǎn)特異性肽譜鑒定

3、方法，位點(diǎn)非特異性肽譜鑒定方法從牛血清白蛋白水解物中鑒定的肽段數(shù)量提高了23％，從大豆蛋白水解物中鑒定的肽段數(shù)量提高了54％，證明該方法能夠獲得更多的肽譜信息，具有更強(qiáng)的肽譜覆蓋能力，且對位點(diǎn)特異性肽譜鑒定方法肽譜結(jié)果的重現(xiàn)率平均達(dá)到了98％以上，證明了該方法同樣具有較高的可靠性。
　　其次，本論文分別通過硫酸銨鹽析、疏水層析、離子交換層析等方法純化了2709堿性蛋白酶。純化后的比酶活達(dá)到了8540u/mg，經(jīng)SDS蛋白凝膠電泳檢