利用果蠅模型研究pygo新型信號途徑.pdf

1、wg/Wnt信號在心臟發(fā)育和心臟衰老過程中發(fā)揮重要的作用。pygo作為Wnt信號途徑的一個新成員，依賴于Wnt信號調(diào)控心臟發(fā)育。本研究室的最新結(jié)果表明，敲低pygo表達導(dǎo)致嚴重的成體心臟功能突變表型，而敲低Wnt/β-catenen-TCF信號成員的表達導(dǎo)致的突變表型，明顯低于pygo的表型水平或無表型。另一方面，TCF的顯性負突變引起與pygo表型一致的嚴重成體心臟生理功能缺陷，提示pygo調(diào)控成體心臟功能不依賴于經(jīng)典Wnt信號，可能

2、依賴與TCF類似因子相互作用而發(fā)揮功能，存在新的調(diào)控機制。因此，利用果蠅心衰模型，探究新型的pygo分子調(diào)控途徑成為了我們的研究重點。
　　為了探究pygo在果蠅成體心臟中的分子調(diào)控機制，本文采用了染色質(zhì)免疫共沉淀結(jié)合高通量測序(CHIP-seq)的方法鑒定pygo基因調(diào)控成體心臟功能的新靶點，首先，運用成體心臟功能分析系統(tǒng)驗證了pygo在維持成體心臟功能中的重要功能。其次通過果蠅雜交實驗構(gòu)建了心臟特異性（hand4.2 Gal4

3、）驅(qū)動UAS-HA-pygo過表達標簽穩(wěn)定系，采用免疫熒光實驗方法證明了HA抗體的有效性，檢測到Pygo蛋白在心管的表達。同時，剝?nèi)∵^表達果蠅品系心管，用甲醛交聯(lián)，并用超聲波將其打斷成一定長度的小片段，取一部分染色質(zhì)作為Input，其余分別加特異性HA抗體，以及陰性對照IgG抗體，解交聯(lián)，純化DNA，最后對文庫DNA進行驗證、質(zhì)檢、高通量測序。測序后對結(jié)果進行多方面處理，去污染及接頭、將測序轉(zhuǎn)化為可視化數(shù)據(jù);通過MACS方法追蹤到799

4、個重要基因組特征峰值，并對其基因結(jié)構(gòu)進行了分類，使用最新的UCSC瀏覽器對數(shù)據(jù)進行結(jié)構(gòu)和功能注釋;對峰值信號進行GO富集聚類分析，Pygo相互作用基因的功能主要定位在染色體結(jié)構(gòu)變化和修飾過程中;分析轉(zhuǎn)錄起始位點TSS附近的峰值分布特征并對三個重復(fù)樣品進行啟動子峰值交叉分析，找到120多個代表基因;并對三個重復(fù)樣品進行信號通路分析，定位到11條重要的信號通路。通過綜合分析我們初步定位到26個Pygo蛋白可能調(diào)控的候選基因。目前，候選基因的