苯酰胺類HIV潛伏激活劑的設(shè)計(jì)、合成及活性評(píng)價(jià).pdf

1、基于人類免疫缺陷病毒（HIV）治療方案中的“激活&消滅”學(xué)說(shuō)，本論文首先研究了苯酰胺類HIV潛伏激活劑（有效激活）的設(shè)計(jì)合成、活性評(píng)價(jià)；隨即探究了配合潛伏激活劑聯(lián)合用藥的4-取代-1,5-二芳基胺類化合物（有效消滅）的活性及類藥性等性質(zhì)，旨在實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒潛伏庫(kù)先激活，后消滅的目的。
　　一、苯酰胺類病毒潛伏激活劑的相關(guān)研究工作
　　自1981年HIV在美國(guó)被首次發(fā)現(xiàn)，30多年間，已蔓延到各大洲，感染數(shù)千萬(wàn)人，造成社會(huì)負(fù)擔(dān)及經(jīng)濟(jì)

2、損失。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法（HAART）是現(xiàn)在臨床上最有效的抗HIV/AIDS治療方案，艾滋病患者在接受HAART治療后可將血漿病毒載量降到不可檢測(cè)的水平。但在停止HAART治療后，其病毒載量將會(huì)迅速反彈，導(dǎo)致艾滋病患者必須終生服藥。HIV的反彈主要是由于病毒潛伏在細(xì)胞的病毒庫(kù)內(nèi)所造成，且該潛伏庫(kù)不能被 HAART清除。HIV潛伏庫(kù)的存在，是HIV難以被徹底清除的根本原因?；凇凹せ?消滅”學(xué)說(shuō)，我們首先設(shè)計(jì)合成了系列抗?jié)摲幕衔?，?/p>

3、期激活潛伏的HIV。
　　北卡大學(xué)李國(guó)雄課題組在研究中發(fā)現(xiàn)了一個(gè)很有特點(diǎn)的抗?jié)摲せ顒罕锦０奉怘DAC抑制劑Lead，它能在低濃度下激活潛伏HIV而無(wú)毒副作用，較目前已經(jīng)進(jìn)入臨床研究的抗?jié)摲幬颯AHA可能具有更優(yōu)良的藥效。因此，我們通過(guò)設(shè)計(jì)合成系列新衍生物，期望提高其抗?jié)摲钚?，使之達(dá)到良好的激活效果。
　　作為探索性研究，我們依據(jù)合理的設(shè)計(jì)思路，采用計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)、生物電子等排原理、骨架躍遷及活性數(shù)據(jù)引導(dǎo)等多種方法相結(jié)

4、合的手段，通過(guò)對(duì)合成方法的不斷優(yōu)化和對(duì)反應(yīng)條件的不斷改良，對(duì)前期研究中發(fā)現(xiàn)的抗?jié)摲葘?dǎo)化合物苯酰胺類HDAC抑制劑Lead的不同部位進(jìn)行了修飾，包括對(duì)與鋅離子結(jié)合的基團(tuán)(ZBG)的環(huán)大小的改變、對(duì)與靶標(biāo)袋狀空腔相互作用的聯(lián)二芳烴結(jié)構(gòu)片段(Diaryl)的多種改變、對(duì)可識(shí)別蛋白靶標(biāo)的親脂性基團(tuán)(CAP)和親脂性鏈(Linker)的修飾，共合成了三大類全新化合物共48個(gè)，其結(jié)構(gòu)均經(jīng)過(guò)MS、1H-NMR確定。
　　對(duì)與鋅離子結(jié)合的功能基

5、團(tuán)(ZBG)的修飾考慮到該類抑制劑分子中ZBG與鋅離子螯合形成的環(huán)的大小的不同，我們?cè)O(shè)想：如果改變螯合環(huán)的大小，或許可以改變ZBG與鋅離子間結(jié)合的強(qiáng)度，從而對(duì)抑制劑的活性產(chǎn)生影響。因此，我們?cè)O(shè)計(jì)合成了三個(gè)系列的目標(biāo)化合物I、II、III，其可分別與HDAC催化活性中心區(qū)域的鋅離子形成七元、六元、五元螯合環(huán)，并評(píng)價(jià)了這些新化合物的抗?jié)摲钚?，從而了解了ZBG與其抗?jié)摲钚灾g的關(guān)系。
　　對(duì)聯(lián)二芳烴結(jié)構(gòu)片段(Diaryl)的結(jié)構(gòu)修飾

6、我們?cè)O(shè)計(jì)合成了將B環(huán)替換為其他基團(tuán)以增加小分子抑制劑與靶標(biāo)的親和力和分子表面的形狀互補(bǔ)性的系列化合物，包括引入：四元飽和雜環(huán)、五元飽和雜環(huán)、六元芳香環(huán)以及對(duì)位連有取代基的六元芳香環(huán)。
　　對(duì)親脂性基團(tuán)(CAP)和親脂性鏈(Linker)的修飾先導(dǎo)物L(fēng)ead的CAP部分很小，我們只引入了較小的基團(tuán)，保持了分子原來(lái)較小CAP部分與靶標(biāo)結(jié)合區(qū)域的結(jié)合模式，而對(duì)于Linker，我們通過(guò)生物等排體的替換來(lái)進(jìn)行了修飾。
　　我們又對(duì)這4

7、8個(gè)目標(biāo)化合物分別在細(xì)胞水平和酶水平上進(jìn)行了抗?jié)摲钚栽u(píng)價(jià)，5個(gè)化合物（5a、5b、29a、45a、45b）的抗?jié)摲钚耘c陽(yáng)性對(duì)照 SAHA相當(dāng)，其中化合物5a的抗?jié)摲钚宰詈茫冶３侄拘暂^低的特點(diǎn)，優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照SAHA，具有進(jìn)一步研究的意義。
　　綜上，此部分的研究對(duì)今后苯酰胺化合物的抗?jié)摲芯烤哂幸欢ń梃b意義，同時(shí)也為研究其抗?jié)摲鼨C(jī)制奠定了基礎(chǔ)。目前，我們正在對(duì)合成的化合物5a的抗?jié)摲鼨C(jī)制進(jìn)行深入研究，以期尋找到高效低毒副作用

8、的新型苯酰胺類HIV潛伏激活劑，最終實(shí)現(xiàn)激活病毒潛伏庫(kù)的目的。
　　二、4-取代-1,5-二芳基胺類病毒抑制劑的類藥性相關(guān)研究工作
　　基于“激活&消滅”學(xué)說(shuō)，在病毒庫(kù)激活后，研究重點(diǎn)轉(zhuǎn)變?yōu)椴《編?kù)的消滅。前期實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，我們已找到具有較好激活病毒庫(kù)活性的苯酰胺類化合物，對(duì)于抗 HIV治療來(lái)說(shuō)，“激活”步驟已經(jīng)完成，治療工作重點(diǎn)轉(zhuǎn)移至“消滅”步驟，即病毒抑制劑的設(shè)計(jì)合成、活性測(cè)定及類藥性評(píng)價(jià)。
　　現(xiàn)行臨床抗 HIV藥

9、物主要分四大類：逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、整合酶抑制劑、進(jìn)入抑制劑。我們又發(fā)現(xiàn)了系列高活性的非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑（HIV-NNRTIs），即4-取代-1,5-二芳基胺類化合物。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，這類4-取代-1,5-二芳基胺類化合物的抗 HIV活性優(yōu)于臨床用藥，對(duì)其進(jìn)一步的開發(fā)非常有必要。
　　我們通過(guò)不斷優(yōu)化質(zhì)譜條件和色譜條件，建立了一套完整的LC-MS/MS定量分析方法，其專屬性強(qiáng)，靈敏度高，檢測(cè)限低，分析速度非常快，可以對(duì)

10、我們的系列4-取代-1,5-二芳基胺類化合物進(jìn)行藥物代謝方面的測(cè)試，也為我們后期開展體內(nèi)藥物代謝相關(guān)研究奠定了基礎(chǔ)。
　　為了豐富4-取代-1,5-二芳基胺類化合物的藥動(dòng)性質(zhì)信息，我們選用人肝微粒體、人肝S9、人血漿分別對(duì)其中23個(gè)活性較好的4-取代-1,5-二芳基胺類化合物進(jìn)行了體外藥代穩(wěn)定性的初步研究，完成了這部分化合物的體外藥代動(dòng)力學(xué)的評(píng)價(jià)工作，并分別獲得了其在人肝微粒體、人肝S9、人血漿中的消除半衰期，從而為我們提供了這部