博爾納病病毒感染人少突膠質(zhì)細胞的代謝組學研究.pdf

1、背景
　　博爾納病病毒(Borna disease virus，BDV)是單股負鏈非節(jié)段性有包膜的RNA病毒，有高度嗜神經(jīng)性，BDV感染后在細胞內(nèi)呈低拷貝復制，呈慢性持續(xù)感染狀態(tài)，使細胞產(chǎn)生非溶解性病變，引起宿主細胞凋亡及細胞功能改變。該病毒宿主廣泛，能感染所有的溫血動物，引起博爾納病。近年來大量流行病學研究提示BDV同人神經(jīng)精神疾病的發(fā)生和發(fā)展存在著密切的關(guān)系。BDV致病機制尚不明確，目前有多種假說，主要包括免疫反應(yīng)，神經(jīng)遞質(zhì)，

2、神經(jīng)可塑性，神經(jīng)營養(yǎng)因子及信號轉(zhuǎn)導等。對BDV感染后宿主代謝的改變更是知之甚少。PlentikovMV等人的研究顯示BDV感染大鼠后會引起去甲腎上腺素、多巴胺、五羥色胺、5-羥基吲哚乙酸和3，4-二羥乙酸等多種代謝產(chǎn)物的變化，可以推測在病毒感染過程中存在著細胞代謝異常，明確這些代謝物的具體變化，對于闡明BDV的慢性持續(xù)感染機制有重要意義。
　　目的
　　獲得BDV感染OL細胞的廣譜代謝物，比較BDV感染與正常OL細胞之間代謝

3、產(chǎn)物的變化，闡明BDV感染的某些生化機制，并闡釋造成代謝產(chǎn)物變化的病理生理機制，最終為BDV致病提供證據(jù)支持。
　　方法
　　從BDV持續(xù)感染細胞中提取BDV病毒液，用所得病毒液重新感染OL細胞，通過RT-PCR，免疫熒光和WB確定感染成功。生長狀態(tài)良好的OL細胞傳代培養(yǎng)至28板后分為2組每組14板，一組用于BDV病毒感染，另外一組作為對照組。在BDV感染第14天分別提取兩組細胞的細胞內(nèi)代謝產(chǎn)物進行核磁共振(1H nucle

4、ar magnetic resonance，1H NMR)檢測，數(shù)據(jù)用偏最小二乘判別分析(PLS-DA)處理。
　　結(jié)果
　　從病毒感染細胞中成功提取到了具有感染能力的BDV病毒，并成功地用該病毒重新感染OL細胞。對BDV感染組和對照組組各14例樣本進行1H NMR分析，定量化分析了21種代謝產(chǎn)物，結(jié)果顯示兩組樣本間存在明顯差異，BDV感染組的丙酮酸鹽濃聚物水平顯著低于對照組(p=0)，谷氨酸、谷氨酰胺和天冬氨酸水平明顯高于