斑馬魚(Danio rerio)特異性抗體IgM的母源性傳遞.pdf

1、母源性免疫是指母體通過胎盤、初乳或卵黃將有免疫活性的免疫因子傳遞給子代并在子代中發(fā)揮免疫作用的現(xiàn)象,是生命早期最重要的保護作用。在魚類中,先天性和適應性免疫因子能由母體傳遞到子代。這些因子包括溶解酵素、補體因子、蛋白酶抑制劑、凝集素和IgM等。目前已在很多硬骨魚卵中發(fā)現(xiàn)了IgM,但卵中的IgM對胚胎是能否起到保護作用還存在爭議。本文擬分離和鑒定斑馬魚血清和卵中的IgM,并通過Western和ELISA技術研究斑馬魚IgM的母源性傳遞。<

2、br>　　 本文首先分離和純化了斑馬魚血清和卵中的IgM。利用葡萄球菌A蛋白(SPA)在PH8.0時具有與魚類免疫球蛋白IgM分子Fc段特異結合的性質,通過親和層析,分離和純化了斑馬魚血清和卵中的IgM,并優(yōu)化了純化過程中的具體細節(jié)。純化后的IgM經(jīng)親和層析圖譜和變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析,結果表明親和層析圖譜中只出現(xiàn)一個峰,說明親和層析柱只與IgM結合,血清中IgM的重鏈分子量約為83 kDa,卵中IgM的重鏈分

3、子量約為90 kDa。
　　 其次,本文通過抗原免疫成體斑馬魚,然后檢測免疫后斑馬魚血清和卵中IgM的水平變化,來研究母源性免疫因子IgM是否對子代具有保護作用。目前的研究已證實母體抗體能傳遞到卵。本研究中,成體雌性斑馬魚每隔十四天腹腔注射一次半抗原載體復合物(三硝基苯酚-牛血清白蛋白,TNP-BSA),共注射四次。通過對注射后斑馬魚血清和卵無細胞體系與正常魚的比較發(fā)現(xiàn)注射后斑馬魚無論是血清還是卵中總蛋白濃度都顯著上升,并且在進

4、行卵無細胞體系western時發(fā)現(xiàn)注射組IgM含量明顯高于正常組,說明免疫親魚有助于提高IgM在卵中的積累。
　　 免疫后的斑馬魚血清用ELISA方法能夠檢測到與TNP-BSA、BSA尤其是TNP-OVA有結合活性。與TNP-OVA有結合活性表明血液中產(chǎn)生了抗TNP抗體。通過ELISA分析發(fā)現(xiàn)卵中有TNP-OVA結合活性,而與OVA沒有結合活性,說明卵提取物中含有抗TNP活性的抗體。這就證明了注射TNP-BSA后的斑馬魚母體抗T

5、NP特異性抗體能夠傳遞到卵并對后代有保護作用。研究中還發(fā)現(xiàn),免疫后的斑馬魚血清和卵中總蛋白含量會有所上升,Western分析發(fā)現(xiàn)免疫后斑馬魚卵提取物中IgM的含量顯著高于未經(jīng)免疫的斑馬魚,說明對斑馬魚的免疫可以提高母源性IgM的含量。
　　 母源性免疫不僅具有理論意義,而且在魚類養(yǎng)殖生產(chǎn)上也具有潛在的實際應用價值。一直以來,人們致力于通過增加卵中凝集素、溶菌酶或IgM含量來增強魚苗免疫力。本論文為通過親魚免疫來增強子代免疫力,進