MxA蛋白的抗體制備及其特異性分析.pdf

1、MxA蛋白是I型干擾素(INF-α/β)所誘導的蛋白，具有廣泛的抗病毒活性(主要針對RNA病毒)。此蛋白產(chǎn)物的誘導動力學特征與細胞的抗病毒狀態(tài)呈完全的平行，病毒感染時內源性干擾素明顯升高，MxA可反映內源性干擾素的狀態(tài)，從而間接反映病毒感染，因此MxA量的升降可作為病毒感染的一個特異的指標。在國外，該蛋白已經(jīng)引起了廣大研究者的關注，并進行了深入的探討；在國內，近年來也逐漸引起學者的興趣。隨著MxA蛋白的深入研究，迫切需要制備對應抗體來開

2、展該項研究工作，而且MxA作為病毒感染的特異性指標，抗MxA單克隆抗體制劑本身也具有開發(fā)利用的潛能，具有廣闊的應用前景。盡管國外已有該蛋白的特異性多抗和單抗，但均未商品化，在國內并未曾有有關報道，因此我們有必要在國內制備對應的高特異性的多抗和單抗供廣大研究工作者使用，并研制MxA快速檢測試劑盒搶占中國市場，為廣大醫(yī)患服務。 本研究在已獲得該基因并重組入克隆載體的基礎上，通過基因工程方法構建原核表達載體pET-32a(+)-MxA

3、，并在工程菌BL21中獲得高效表達，蛋白含量可達菌體總蛋白量的25％，以割膠純化的純度達90％以上的目的蛋白進行腹腔注射免疫小鼠并利用不同形式的MxA蛋白作為抗原對抗血清進行特異性分析，結果表明獲得了特異性較高的抗血清；繼而使用PEG4000利用細胞融合技術將該蛋白免疫的Balb/c小鼠的脾臟細胞與鼠骨髓瘤細胞系Sp2/0細胞融合，經(jīng)三輪單克隆后成功地獲得了分泌該蛋白單克隆抗體的雜交瘤細胞，命名為雜交瘤細胞3C2，利用Western-b